蛋白质两民性解离.pptVIP

这样的药物是如何生产的？ 一、目的 （1）熟悉蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子沉淀的关系 （2）掌握蛋白质等电点的测定方法 (pH法) 二、原理 蛋白质是两性电解质 。 蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。 当溶液的pH达到某值，蛋白质颗粒上正负电荷数目相等。 在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动。 此时，溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点(pI)。 不同蛋白质各有其特异的等电点。 在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化。 可利用此种变化测定各种蛋白质的等电点。 最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。 本实验借观察在不同pH溶液中,酪蛋白的溶解度以测定其等电点。 用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。 向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 三、材料 （一）试剂 1mol/L乙酸 0.1mol/L乙酸 0.01mol/L乙酸 0.02mol/LNaOH 0.02mol/L盐酸 0.01%溴甲酚绿指示剂 0.5%酪蛋白溶液 （二）器材 试管架 试管：15ml×6 刻度吸管：1ml×4，2ml×4，10ml×2 胶头吸管×2 四、操作 一、蛋白质的两性解离 （1）取一支试管，加0.5%酪蛋白1ml，再加溴甲酚绿指示剂4滴，摇匀。 （2）用胶头滴管慢慢加入0.2mol/L盐酸，边加边摇直至有大量的沉淀生成。观察溶液颜色的变化。 （3）继续滴加0.2mol/L盐酸，沉淀会逐渐减少以至消失。观察此时溶液颜色的变化。 （4）滴加0.2mol/L NaOH 进行中和，沉淀又出现。继续滴加0.2mol/L NaOH，沉淀又逐渐消失。观察溶液颜色的变化。 二、酪蛋白等电点的测定 （1）取同样规格的试管5支，按下表精确地加入下列试剂后，充分混悬 （2）用-、+、++、+++等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。 五、注意事项 滴加液体后要迅速混匀 * *