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3730xl测序仪的原理 双脱氧链终止法测序原理 3730xl测序仪的构造 3730xl测序仪的特点 测序基本流程 3730xl测序仪的应用 文库类型及特点 1977年，英国人Fred Sanger 发现，如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会产生一系列末端终止的DNA链，并能通过电泳按长度分辨。 不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。 由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。 测序反应与PCR的比较 PCR 测序反应 DNA 聚合酶 Taq酶 测序酶 引物 一对 单向 底物 dNTP dNTP+ddNTP* 模板 量少 质量要求高 产物 等长的DNA片段 相差一个碱基的一系l列片段 荧光标记 无 3’端带荧光标记 测序产物 指数扩增 线性扩增 遗传分析仪系统组成 专利的荧光检测技术 激发：Dual Side Illumination双束激光两侧同时激发：灵敏度+均匀性+超速测序 检测：光栅+低温CCD同步成像 3730xl型遗传分析仪 双光束激光实时激发荧光 全波长实时荧光检测：光栅分光，后置超簿型CCD检测 96个样品自动进样及一体化16板自动进样样品架 内置样品板条形码自动识别 100次（9600个样品）运行试剂一次上机 自动碱基识别与质量评分软件 长读测序POP-7液体分离胶，动态内镀毛细管 电泳温度18-70 C可调 DNA测序基本流程 准备模板：质粒、PCR产物 抽样检查DNA浓度和质量，必要时纯化 测序PCR反应 纯化测序产物 变性 上机电泳 分析数据 DNA测序技术应用 测序的应用 Long read with BigDye? Terminator v3.1: 1010bp 杂合子检测：发现新突变位点 再测序 人类基因组计划的完成，为遗传分析开创了新的研究领域 其他物种的测序项目已经启动 再测序项目的特点 可以更好的理解遗传多样性在疾病中的作用 可以在各种规模的实验室中进行，而不是仅限于基因组测序中心 要求更高质量的数据 基因分析技术在生物、医学、农牧业领域的应用 文库类型及特点 基因文库（Gene Library） 基因组文库（Genomic Library ） cDNA 文库（cDNA Library） 基因组文库 含有某种生物全部遗传信息的重组DNA分子的克隆总和 基因组文库常用的载体及特点 质粒载体 简单、快速、易于操作，但仅适合一些低等真核生物和原核生物，如：pBR322,pUC18,pGEM λ噬菌体载体 由λ噬菌体改建而来，需要在体外包装成噬菌体颗粒，再转染受体细胞 粘质粒载体（cosmid) 具有质粒和λ噬菌体两种载体的性质 人工染色体 能容纳大片段的外源DNA。如YAC(酵母人工染色体），BAC(细菌人工染色体），PAC(P1来源的人工染色体），MAC（哺乳动物人工染色体） 各种克隆载体的比较 cDNA 文库 直接以完整的mRNA为模板反转录成的全长cDNA分子与克隆载体连接后，转导到寄主细胞，经复制形成的在寄主细胞中保存的许多克隆 分类 质粒cDNA文库 噬菌体cDNA文库 表达文库 非表达文库 未处理cDNA文库 均一化cDNA文库 差减cDNA文库 普通cDNA文库应用领域 发现SNP 克隆新基因 基因表达谱分析 从EST中发掘SSR标记 挖掘与病害、发育等功能相关的关键基因 开展转基因等功能研究，以改变某生物的性状。 保护濒危珍