腺相关病毒介导胰岛素样生长因子I对高糖诱导神经元凋亡的保护作用.PDFVIP

·330· ·论著· 腺相关病毒介导胰岛素样生长因子I对高糖 诱导神经元凋亡的保护作用 杨炜青李逊鲁雄兵吴文起 雷鸣 曾国华何永忠何朝辉 目的研究萤组腺相关病毒(AAV)载体介导胰岛素样生长冈子I(IGF 【摘要】 I)在体外神经元 表达的情况，及其对高糖诱导神经兀凋亡的保护作用。方法利用分子克隆技术将大鼠IGFI基I矧克 I的杂合型重组AAV载体rAAV2／I．IGFI。 隆到pSNAV2．0质粒上，构建包含重组质粒pSNAV2．0．IGF 将人神经母细胞瘤SH．SY5Y细胞分为正常组(A组)、无血清组(B组)、无血清高糖组(C组)，无血清高 糖+rAAV2／I．IGFI组(D组)，其中A组不做任何处理；B组使用无血清培养基培养；C组用含100 mmol／L mmoFL D．葡萄糖的无血清培养基培养；D组则先用rAAV2／1．IGFI病毒载体感染后再用含100 D．葡萄糖的无血清培养基处理。干预24h后应用RT．PCR和Western免疫印迹检测各组IGFI基I蚓和 蛋白的表达情况；应用Hoechst33342荧光染色法、AnnexinV．FITC／PI双染法流式细胞仪检测细胞凋 亡。观察rAAV2／1．IGFI感染后对高糖诱导SH—SY5Y细胞凋亡的保护作用。结果成功构建 rAAV2／1．IGF I重组AAV载体。感染SH．SY5Y细胞后，RT．PCR显示SH—SY5Y能表达大鼠IGFI基因： Western免疫印迹检测发现D组IGFI蛋白的表达水平(0．44±0．04)显著高于其他3组(A组0．29+0．02，B 组0．17+0．02，C组0．08±0．02，均PO．05)。rAAV2／1．IGFI能明显降低高糖诱导细胞凋亡的凋亡率： 1．81)％，D组(14．50±2．27)％。各组J’开J差异均有统计学意义(JpO．05)；流式细胞仪分析结果表明 计学意义(PO．05)。结论rAAV2／1．IGFI感染体外神经元SH．SY5Y细胞能显著表达IGFI蛋白，并 有效地降低高糖对神经元的诱导凋亡作用。 【关键词】胰岛素样生长因子I；神经元；细胞凋亡；腺相关病毒；高糖 ofadeno··associatedvirusmediatedinsulin··likefactorI neuron Protection growth against apoptosis YANG induced glucose Xun．LU byhigh-level Wei—qing，U Xiong·bing，WUWen-qi，LEIMing，ZENG Guo—hua，HE of Invasive Center。The Yong·zhong，HEZhao—hui。．’DepartmemUrology，MinimallySurgery First Medical 510230，China AffiliatedHospital，GuangzhouCollege，Guangzhou author：HE CorrespondingZhao-hui，Email：gzgyhzh@163．corn To the ofrecombinantadeno—associated 【Abstract】0bjectivestudyexpression virus(AAV) factor culturedneuronstlIe ofrecombinant mediatedinsuJin．1ike I(IGFI)in and AAV growth