组织化学技术4前-酶组化.pptVIP

第二章 酶组织化学 酶组织化学（Enzyme Histochemistry）是利用组织细胞内酶具有催化某种反应的特性来检测酶活性。一般是用冻结或固定的切片，再一定条件下（具有酶的底物等）全酶进行催化作用，产生一种可见产物，沉淀在酶所在的部位，最终通过显微镜对酶的活性进行定位或定量研究。 ※ 特点： ① 在原位检测 ② 检测酶的活性而不是酶分子本身 酶的分类：按生物化学分类——六大类 ① 氧化还原酶 ② 转移酶 ③水解酶 ④ 裂解酶 ⑤异构酶 ⑥连接酶 常用检测方法 1．沉淀法 ①金属沉淀法：Ca++—Co++法；Pb法 ②偶联法：重氮盐法 ③ 靛原法 ④四唑盐法 2．后偶联法Post-coupling（ACP） 3．合成法 4．底物膜法 设计半透膜 切片/ 孵育法 ★★★ 影响酶组化实验的关键因素 ① 酶活性的保存 a）固定：酶组化的固定剂有教严格的限制，不 同的酶适用不同的固定剂 △ 抑制酶活性和细胞化学成分活性的重金