实验质粒d的na的转化.pptVIP

实验四、质粒DNA的转化; 一 实验目的;一、实验目的;转化（transformation）:把外源DNA分子导入到某一宿主细菌细胞的过程称为转化。当细菌处于容易吸收外源DNA的状态即感受态时，转化最易发生。 当受体菌处于感受态时，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羧基钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收外源DNA。在培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中，载体中抗抗生素基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子（transformant）。;三、材料仪器; 实验材料 大肠杆菌DH5α感受态细胞； 质粒DNA:pCR4ToPoGt5GT7(Kan+Amp抗性)； LB固体培养基； 含Kan+Amp的LB固体培养基：将配好的LB 固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右，加入Amp和Kan储存液，使终浓度分别为50μg/ml，摇匀后铺板。;1．从冰箱中取出感受态细胞，放置冰上； 2．每组分别取2管20μl感受态细胞悬液； 第一管为转化实验组：1μl重组质粒DNA+20μl感受态细胞； 第二管为阴性对照组；加入1μl无菌水+20μl感受态细胞悬液；轻轻摇匀，冰上放置30分钟； 3．将管放入42 ℃恒温水浴中90秒，迅速将eppendorf管移到冰浴上，冷却2 min；;4.向上述eppendorf管中