基因芯片表达谱在胆管癌中的应用-外科学(普通外科)专业论文.docxVIP

华中科技大学同渚医学院 华中科技大学同渚医学院 博士学位论文 基因芯片表达谱在胆管癌中的应用 博士研究生： 曹庭加 博士生导师： 易继林教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科 月U 舌 胆管癌是一种隐匿性发展的恶性肿瘤，主要症状为无痛性进行性加重黄 疸，早期诊断困难。生长缓慢，但较早可发生胆管周围及肝内转移；因其解 剖位置特殊，手术难以达到根治的目的，临床预后较差。胆管癌的发g气，发 展是多步骤、多种因素参与的极复杂过程，涉及多个基因参与细胞周期调节、 凋亡、J『Ⅱ管生成、癌细胞粘附、迁移运动、侵袭、免疫逃避、信号转导等． 分析胆管癌相关基因及转移相关基因，有利于从分子生物学了解胆管癌的发 病及转移机制。 随着分子生物学的进展，从基因、分子水平上对胆管癌参与基因的研究 得到广泛深入：基因芯片(cDNA microarray)是利用芯片技术中信息集成化和 平行处理原理，收集成千上万个特定的寡核苷酸或DNA片段固定于特定的基 质上，通过碱基互补配对原理进行杂交：能够高通量，高效率，低消耗地对 生物学信息进行快速分析处理，大规模的获驶相关生物信息的重要手段，筛 选癌症发生、发展可能的相关基因，探索胆管癌生物学特性与基因差异表达 之间的内在联系，是近年来新兴的一项前沿生物技术。目前，该技术应用领 域主要有基因表达谱分析、新基因发现、基因突变及多态性分析、基因组文 库作图、疾病珍断的预测、药物筛选、基因测序等。 利用基因芯片高通量、自动化优点，对来源于不同个体，不同细胞周期， 华中科技土学同许医学院 华中科技土学同许医学院 博士学位论文 不同分化阶段肿瘤细胞DNA进行检测，缩短了实验周期，迅速将某些基因与 转移相关因素联系起来，加快了基因功能确定和明确。基因芯片能全面、综 合分析某些疾病特别是肿瘤的发生、发展，能确定人体细胞内所有基因的表 达谱，同时获得数以万计的基因活化模式。以此表达谱为对照，对表达谱改 变的个体进一步的分析，可得出某种疾病、甚至能随时获取肿瘤细胞生长各 期与肿瘤生长相关表达谱，也能对癌前病变组织及癌周组织细胞的表达谱进 行分析，了ffff-t]十瘤发展过程中表达谱变化，为研究肿瘤发生发展提供强有力 工具。 通过分析腱管癌基因芯片表达谱，达到了解胆管癌肿瘤相关及转移相关 基因、肿瘤的标记物、靶基因，以及各差异表达基因可能功效，分析主要基 ㈤(14J功能表达．以朔通过胆管癌基因群的表达谱变化及生物学特性分析，为 临床早期渗断及基因治疗提供依据。 华中科技大学同许医学院 华中科技大学同许医学院 博士学位论文 中文摘要 第一部分 基因芯片在筛选胆管癌相关基因差异性表达的应用研究 目的应用eDNA芯片技术，进行肝外胆管癌相关基因表达谱差异分析，筛选 胆管痈相关基因。 方法按。步法分别抽提6例胆管癌和正常人胆管粘膜总RNA、纯化，逆转 录合成掺入荧光分子的eDNA链探针，与1068条人PCR微矩阵芯片杂 交．扫摘芯片荧光信号图象，计算机分析比较二种组织基因表达谱差异。 结果胆管癌与正常胆管粘膜的基因表达谱分析，有194条基因表达有明显差 异，与肿瘤相关基因一致表达的47条，23条表达上调，24条表达管调。 结论基因芯片能快速筛选胆管癌相关基因，分析这些差异表达的基因能够阐 明胆管癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系，并可能找到肿 瘤的标记物。 关键词 基因芯片 胆管癌 表达谱 肿瘤相关基因 肆中科技大学同济医学院 肆中科技大学同济医学院 博士学位论文 第二部分 基因芯片在胆管癌转移相关基因差异性表达应用研究 目的应用cDNA芯片技术，进行肝外胆管癌转移相关基因表达谱差异分析， 筛选胆管癌转移相关基因。 方法按一步法分别抽提4例胆管转移癌和正常人胆管粘膜总RNA、纯化， 逆转录合成掺入荧光分子的cDNA链探针，与1068条人PCR微矩阵芯 片杂交，扫捕芯片荧光信号图象，计算机分析比较二种组织基因表达谱 差异。 结果胆管转移癌与正常胆管粘膜的基因表达谱分析，有232条基因表达有明 显差异，与转移相关基因一致的表达14条，8条表达上调，6条表达下 调。 结论胆管癌转移相关基因的差异表达与其他高度恶性肿瘤转移相关基因有 明显的差异，有其自身的生物学特性，IGF2和MMP．2高表达与肿瘤转 移呈I-1III关。 关键词 基因芯片；胆管癌：表达谱；转移相关基因 华中科技上学同许医学院 华中科技上学同许医学院 博士学位论文 第三部分 CD54和IGF．II在胆管癌中表达及与预后关系 目的IGF．If和CD54参与肿瘤发生、发展和转移。本研究旨在胆