化合物n308的初步免疫药理学研究-生药学专业论文.docxVIP

夔奎塑星墼生茎塞全鱼型竖耋垂塞堑量丛生墓塞全叁型璧耋 夔奎塑星墼生茎塞全鱼型竖耋 垂塞堑量丛生墓塞全叁型璧耋 缩写 英文全名 中文名 Concanava[in A 伴刀豆蛋白A Cyc／osporin A 环胞素A Enzyme—Linked[mmunosorbent Assay 酶联免疫吸附实验 Interferon-y y，1二扰素 Interleukin一2 白介素．2 Interleukin一4 自介素．4 Interleukin一10 臼介素．10 Plaque—Forming Cell 窄斑形成细胞 Senescence Accelerated Mouse 快速老化小鼠 一姒邮料妣叭㈣眦涨一n Sheep Red Blood Cell 绵羊红细胞 T—helper 辅助T细胞 F-suppressor 抑制T细胞 Double Distilled Water 双蒸水 Tetrazolium Bromide 噻哗蓝 b一町一～ Dimethyl Sulfoxide 二甲亚砜 Avian(myeloblastosis virus) reverse禽源(自血病毒) transcriptase PCR Polymerase Chain Reaction 集合酶链式反应 RT·PCR Reverse transcription PCR 反转录PCR FCS Fetal CalfSerum 胎牛血清 CaN Calcineurin 钙调磷酸酶 』卫——————堕堕幽丑——～一 熊壁塑 中文摘望化合物N308的初步免疫药理学研究 中文摘望 化合物N308的初步免疫药理学研究 研究生：方兰艳 导师：郭顺星 沈倍奋 (中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所北京100094) 摘 要 本文首先对105个应用组合化学合成的强免疫抑制剂FK506的结构衍 牛物进行了粗筛，以检测它们是否已不具有免疫抑制活性。山于其r}-的一 个化合物N308体内和体外试验均显示具有促神经生长的活性，于是观察了 N308对m常小鼠和免疫功能失衡模型小鼠免疫功能的影响，然后在分f和 基因水平进行了进一步的研究。 | ／ ．粗筛试验 ＼ 应用组合化学的方法合成了105个FK506的结构f}j生物，并从中寻找 从j}有促神经乍长活性而无免疫抑制作用的目标化合物。为了初步评价化 合物合成思路的正确与否，应用MTT方法观察了这105个化合物对小鼠脾 细胞增殖反应的影响，初步评价它们是否已不具有免疫抑制作用。体外应 用所有的化合物在lnM，10nM和100nM浓度范围内未观察到对小鼠脾细 胞增殖反应的影响。以上结果可初步证实这些化合物t24再具有显著的体 外免疫抑制活性。 二．N308的免疫药理作用特点 1．N308对正常小鼠免疫功能的影响 体外应用N308存10nM和100nM浓度时未观察到对小鼠脾细胞的细 胞毒作用，并H．10nM和100nM的N308均刈ConA诱导的小鼠脚细胞增 熵反应有明显的促进作用。但是10nM和100nM的N308均刈小鼠牌细胞 抗体生成反应和LPS诱导的小鼠脾细胞生成lgG能力无明显影响。 中文摘要腹腔注射N308两次(剂量为25mg．kg～，问隔15小时)，对小鼠脾细胞 中文摘要 腹腔注射N308两次(剂量为25mg．kg～，问隔15小时)，对小鼠脾细胞 自发性增殖反应及ConA诱导的脾细胞增殖反应均没有明显影晌，而阳性 对照药FK506则对它们均具有明显的抑制作用。通过RT—PCR检测，结果 显示N308对Thl细胞亚群特征因子IL．2的mRNA水平没有显著影响，而 阳性对照药FK506则使之水平明显降低。 皮下注射N308(5 mg．kg～、10mgkg～、20mg．kg～，连续20天)，对CoxaA 诱导的脾细胞增殖反应具有明显促进作用，且以lOmg．kg。1组作用最为显著， 但划自发性增殖反应和LPS诱导的脾细胞增殖反应无显著影响。皮下注射 N308(5 mg．kg～、10 mg．kg～、20mg．kg～，连续20天)，对脾细胞抗体生成 反心、LPS诱导脾细胞生成lgG的能力年¨ConA诱导脾细胞分泌IL一2的能 力办有明显促进作用，且均以lOmg．kg’1组效果最为显著，但对ConA诱导 脾细胞分泌Y—IFN的能力而言，仅5mg．kg。1组具有显著促进作用。RT．PCR 结果显示，5和10 mg．kg。。组对IL一2和T-IFN的mRNA水平无显著影响， 但足20rag．kg。1组则会明显降低它们的mRNA水平。 以E结果提示体外应用N308刚使在较大剂量时仍无明显免疫抑制作 用，相反』i|J nJ‘促进小鼠脾细胞的增殖反应。急性给了，小鼠大量N308也不会 对小鼠的免疫功能有显著的抑制作用。体内长期给予N308(5