第七章 生物样品内中药制剂化学成分分析.pptVIP

第四节 生物样品内药物分析方法 三、方法的评价 （一）专属性 （二）标准曲线与定量范围 （三）准确度 （四）精密度 （五）定量限与检测限 （六）样品稳定性 第四节 生物样品内药物分析方法 （一）专属性 1、目的：证明所测定的物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定。 2、方法：色谱法至少要考察6个不同个体空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图。 第四节 生物样品内药物分析方法 （二）标准曲线与定量范围 方法：将药物对照品（实为对照品溶液）加入与供测样品相同的空白生物基质中混匀，配成已知药浓的标准品样品，然后按照样品预处理的方法进行处理后测定，将响应值与药浓建立标准曲线 使标准样品与供测样品均处于相同的生物基质 环境中，按相同方法平行处理和测定，将 所有样品中的药物及标准曲线各浓度标准样品 中的药物均按相同比例表现为响应值 第四节 生物样品内药物分析方法 （二）标准曲线与定量范围 注意： 1.标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。 2.用至少5个浓度建立标准曲线，定量范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。 3.建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。 第四节 生物样品内药物分析方法 （三）准确度 方法：将已知量的药物纯品加到空白样品中经过一系列的处理、测定，所得药物量与加入量之比值得百分率即为回收率 注意：每次测定所得回收率要保持恒定、重现性好 分类：绝对回收率和方法回收率 第四节 生物样品内药物分析方法 1.绝对回收率：又称萃取回收率、提取回收率,反映一个方法的萃取效率 高、中、低三种浓度 吹干 吹干 甲 乙 +空白体液 +混匀 +有机溶剂萃取 取萃取液，吹干 +有机溶剂溶解 +有机溶剂溶解 分析 分析 结果比较 第四节 生物样品内药物分析方法 1.绝对回收率： 高、中、低浓度的选择：低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品。相对标准差一般应小于15%，在定量下限附近相对标准差应小于20%。 绝对回收率数据要求：≥50％ 第四节 生物样品内药物分析方法 2.方法回收率：又称为相对回收率 加样回收实验法 R＝(M-P)/A ×100％ 85％~115%(样品药浓≥200μg/L) 80％~120％（样品药浓＜ 200μg/L） 考察加入药物量在真实样品中的回收率， 因此加入药物量应有高、中、低三种， 而含药物的真实样品则可仅使用一种浓度， 应将该浓度样品事先测定3~5次后取均值，作为原药量p， 然后加入高、中、低不同量的药物标准品溶液。 第四节 生物样品内药物分析方法 （三）准确度 绝对回收率和方法回收率的区别： 方法回收率：表示分析方法的准确度，加样回收实验 萃取回收率：指经预处理后能将生物样品中的药物用于分析的比例 第四节 生物样品内药物分析方法 （四）精密度 1、方法：要求选择3个浓度的质控样品（含药物的真实样品）同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品。 2、内容：日内精密度和日间精密度 第四节 生物样品内药物分析方法 2.1日内精密度：考察分析方法在短期内的变异情况 2.2日间精密度：考察样品测定时使用的标准曲线、仪器性能、试剂来源，以及环境条件等都可能有微小变化，从而导致分析结果的变异程度。 第四节 生物样品内药物分析方法 2.3进行日间精密度的方法：可使用日内精密度测定时使用的三种药浓样品，在一周内不同日分别测定3~5次，计算RSD。 3.精密度数据要求：一般可控制在RSD≤15％ 第四节 生物样品内药物分析方法 （五）定量限 定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求至少能满足测定3~5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10~1/20时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%~120%范围内，RSD应小于20%。应由至少5个标准样品测试结果证明。 第四节 生物样品内药物分析方法 （六）稳定性 目的：对含药生物样品在室温、冰冻或冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存放条件和时间。还应注意储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性。 第四节 生物样品内药物分析方法 （六）稳定性 1.冷冻条件下的稳定性 2.短期室温稳定性 3.冷冻－解冻稳定性 4.贮备液稳定性 第四节 生物样品内药物分析方法 1.冷冻条件下的稳定性 1.1可将样品分成小份冷冻，每隔