生物化学DNA生物合成.pptVIP

DNA 聚合酶 polⅠ polⅡ pol Ⅲ 亚基数目 1 ≥7 ≥10 5 ′→3 ′聚合酶活性 + + + 3 ′→5 ′外切酶活性 + + + 5 ′→3 ′外切酶活性 + - - 聚合速度(核苷酸/分) 1 000-1 200 2 400 15 000-60 000 持续合成能力 3-200 1 500 ≥500 000 功能 切除引物,修复 修复 复制 表 大肠杆菌3种DNA聚合酶性质比较 （1）DNA的半不连续复制： DNA双链复制时，一条链是连续合成的(前导链, leading strand), 另一条链是不连续合成的(滞后链或后随链, lagging strand), 这种前导链的连续复制和后随链的不连续复制方式称DNA的半不连续复制。 （二）双链DNA复制的分子机制 1、冈崎片段和半不连续复制 （2）冈崎片段： 在不连续的后随链DNA合成中形成的DNA短片段，在原核生物有1000～2000核苷酸，真核生物约100～200核苷酸。1968年冈崎发现。 3? 5? 3? 5? 3′ 5′ 3′ 5′ 解链方向 领头链 (leading strand) 后随链 (lagging strand) DNA的半不连续复制 3′ 5′ 复制叉 起点 复制叉 延伸 延伸 起点 领头链 领头链 随后链 随后链 3’ 5’ 3’ 5’ DNA的双向复制 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 2、DNA半不连续复制中的RNA引物 （1）前导链和滞后链的合成都需要RNA引物。 （2）引物合成酶(引发酶)：是以DNA 为模板的RNA聚合酶（合成方向5′→3′）, 合 成的引物长度为5～10多个核苷酸。 (3) 引物RNA的起始和终止的位置受解链酶、 引发酶、模板顺序及其二级结构的影响。 （4）DNA聚合酶Ⅰ切除前导链及冈崎片段的引 物后, 填补空缺，由DNA连接酶将切口连接。 RNA引物的合成称作“引发” 。 后随链的合成需多次引发作用，而发动前 导链的合成只需一次引发。 前导链的引物一般比冈崎片段的引物略长一 些，前者大约为10～60nt，后者通常为几个～10 多个nt。 成熟的DNA是不含RNA的，RNA引物最终被 DNA所置换。 3、DNA连接酶（ligase） 催化两段DNA之间的连接: 3 5 5 3 5 3 5 3 HO P DNA ligase NAD ATP NMN AMP+PPi ′ ′ ′ ′ ′ ′ ′ ′ + DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中 一条链有切口, 一端是3′-OH, 另一端是5′-磷酸 基, 连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但它不能将两条游离的DNA单链连接起来。 大肠杆菌和其它细菌的DNA连接酶需要NAD+ 提供能量;在真核生物、病毒和噬菌体中，则要 ATP提供能量。 3 5 3 5 OH P 4. 母本DNA双链的分离 (1) DNA解链酶(解螺旋酶)：通过水解ATP将复制叉前方的DNA双链打开。每解开一对碱基需要水解2个ATP分子。 (2) 单链结合蛋白(single-strand binding protein, SSB)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 (3) DNA转轴酶（拓扑异构酶Ⅰ）和旋转酶（拓扑异构酶Ⅱ）: 兼有内切酶和连接酶活性, 可迅速使DNA两条链断开又接上, 消除解链酶产生的拓扑张力。当引入负超螺旋时需要由ATP提供能量, 同复制有关。 总结: 原核生物DNA的复制过程:(以大肠杆菌为例) ● 双链的解开 ● 起始----RNA引物的合成 ● DNA链的延伸