细胞培养工程 01 绪论.pptVIP

* * 现代动物细胞培养生物医药工业的主要技术构成 分子生物学与基因工程技术 基因表达机制 基因表达载体构建 宿主细胞设计： CHO：DHFR 双敲除 CHO/NS0：GS 系统 PER C6，HEK293 蛋白质纯化 亲和层析：Protein-A/G; AKTA：提高纯化工艺过程开发速度和质量； 更多的树脂选择； 膜技术：过滤、浓缩。 大规模细胞培养技术 细胞株构建与筛选 合成培养基 无血清培养基 无蛋白培养基 无动物成份培养基 化学成份明确培养基 搅拌式生物反应器 （发酵罐）与过程放大 蛋白质表达过程方式 稳定表达 瞬时表达 * * H1N1 疫苗生产全过程 传统病毒疫苗生产工艺： 鸡胚接种 蛋源：海兰白（鸡龄 30-56 周） 每天耗费鸡蛋 54000 个 H1N1病毒裂解 H1疫苗原液 3000 毫升 相当于疫苗 70000 多支 副作用：卵清蛋白 病毒疫苗生产现代化工艺： 细胞无血清悬浮培养（如 Vero 细胞） 工艺要点： 细胞株对病毒敏感、产量高； 细胞生长、病毒接种时间与接种量、产物回收等； 优势：工艺稳定，效率高，无原料限制。 总 结 细胞培养为现代医学、生物学和药学研究不可或缺的手段 细胞培养技术是生物制药产业的核心工业技术，蛋白质药物与疫苗行业在未来的国民经济中会扮演越来越重要的角色，为人类疾病诊断治疗和生活质量改善提供前所未有的可能 细胞培养工程的理论知识和实践艺术对于细胞药物（包括肿瘤免疫治疗、细胞治疗、干细胞与组织工程）具有直接的借鉴作用，对新型治疗技术的创造性设计和研发具有指导作用 * * 人类对药的认识过程 早期人类在生活物资的寻找活动中，经过反复尝试，对具有某些疗效作用的自然资源有了初步认识 中草药，“药食同源” 古印度医药 古希腊医药 阿拉伯医药：整合各种传统医药知识并进一步发展，为欧洲文艺复兴、发展现代医学具有衔接作用 随着科学认知与技术手段的不断深入与发展，人类在不断探索实践中发现和发明新的药物 进入21世纪，人类基因组测序完成之后，干细胞治疗、肿瘤免疫治疗、基因编辑（CRISPR）等新兴领域将把医药与医疗带入史无前例的时代 * 鸦 片 作为食物、麻醉和宗教活动用品，鸦片种植可以追溯到新石器时代； 外科手术麻醉止痛：古代希腊、罗马、埃及、印度、波斯和阿拉伯帝国； 唐代由阿拉伯商人输入，“或单独吞食，如服金丹；或和以他药，煎汤饮服”； 明朝成化年间（15 世纪）成为上层社会的 “娱乐药品” 17 世纪烟枪在台湾发明，“东亚病夫” 20 世纪中药：祛痰止咳 复方甘草片（含阿片） 复方甘草口服溶液（含吗啡） 对鸦片的初步理性认识 - 吗啡 德国化学家 Friedrich Sertürner 1804 年第一次分离得到 1817 年开始出售 1827 年 Merck 药厂成立 主要用途：严重急慢性疼痛，晚期癌症患者呼吸急促 主要副作用 成瘾：心理性与生理性 荷尔蒙不平衡，耐受，大便干燥 1952 年实现全化学合成以及若干种衍生物合成 （小分子，化学药） * * 对鸦片的现代理性认识 - 鸦片受体 鸦片受体 蛋白质，分布于中枢神经系统 μ、?、?-opioid 受体 对止痛、镇静和精神愉悦等生理现象起关键作用 后继信号传导影响 基因表达： 线粒体呼吸链、细胞骨架蛋白质合成 降低免疫力，增加被感染的风险。 体内自然存在内源性类鸦片类物质，包括内源性吗啡、内啡肽类、强啡肽类物质，具有止痛、促眠和愉悦作用。 * 以鸦片受体为靶点的新药开发 化学药：现代生物技术可以实现体外鸦片受体蛋白质表达（生产制备）和鸦片受体细胞的体外培养，对于发现效果更好、副作用更低的小分子神经类药物至关重要 大幅度提高相关药物的筛选效率 对鸦片受体蛋白质的空间结构分析可以为药物理性设计提供强有力支持 生物药：针对鸦片受体的蛋白质大分子（如抗体药物）可以与鸦片受体特异性结合，甚至中和鸦片受体，干扰或阻止吗啡与鸦片受体的结合 * 人生的“精彩篇章” 生：上帝导演，父母打工，跟咱没商量，上帝也能被忽悠； 老：延年益寿； 病：好死不如赖活着，养活了大夫和药厂； 死：最后一次交税 细胞培养工程 * 可同时提供大量生物性质相同的细胞（如人细胞）作为研究对象，不但成本低，还解决实验对象来源问题 * 南开大学药学院 生物技术制药基础 南开大学药学院 生物技术制药基础 南开大学药学院 生物技术制药基础 南开大学药学院 生物技术制药基础 * 人胰岛素类似物 第三代胰岛素 20 世纪 90 年代末，基于对人胰岛素结构与功能的深入了解，研制更适合人体生理需要、更方便使用的胰岛素类似物 利用基因工程技术改变胰岛素肽链上某些位点的氨基酸组合（蛋白质工程），改变等电点，增加六聚体强度； 以钴离子替代锌离子； 在分子