基因工程制备微藻生物柴油中两项关键技术的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 摘 要 1 HYPERLINK \l _bookmark1 Abstract 3 HYPERLINK \l _bookmark2 引言 6 HYPERLINK \l _bookmark3 1. 微藻生物柴油的研究 6 HYPERLINK \l _bookmark4 1.1 全球能源危机 6 HYPERLINK \l _bookmark5 1.2 微藻生物柴油的优势 6 HYPERLINK \l _bookmark6 1.3 微藻生物柴油生产流程 8 HYPERLINK \l _bookmark7 2. PEPC 酶的研究 15 HYPERLINK \l _bookmark8 2.1 PEPC 酶简介 15 HYPERLINK \l _bookmark9 2.2 PEPC 酶的结构特征 16 HYPERLINK \l _bookmark10 2.3 PEPC 酶的功能 17 HYPERLINK \l _bookmark11 本研究的目的、内容及意义 18 HYPERLINK \l _bookmark12 第一章 海水小球藻磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（Chpepc2）克隆和生物信息学 HYPERLINK \l _bookmark12 分析 19 HYPERLINK \l _bookmark13 1. 材料与方法 19 HYPERLINK \l _bookmark14 1.1 藻种及培养条件 19 HYPERLINK \l _bookmark15 1.2 海水小球藻总 RNA 提取和 cDNA 逆转录合成 19 HYPERLINK \l _bookmark16 1.3 海水小球藻 pepc2 基因 (Chpepc2) cDNA 全序列获得 20 HYPERLINK \l _bookmark17 1.4 海水小球藻 pepc2 基因 cDNA 生物信息学分析 20 HYPERLINK \l _bookmark18 2 结果 21 HYPERLINK \l _bookmark19 2.1 海水小球藻 pepc2 基因 (Chpepc2) cDNA 全序列克隆与测序 21 HYPERLINK \l _bookmark20 2.2 海水小球藻 pepc2 基因 cDNA 生物信息学分析 23 HYPERLINK \l _bookmark21 3. 讨论： 30 HYPERLINK \l _bookmark22 3.1 海水小球藻 pepc2 基因的克隆与结构特征分析 30 HYPERLINK \l _bookmark23 3.2 海水小球藻 PEPCase2 的功能分析 31 HYPERLINK \l _bookmark24 第二章 海水小球藻 pepc2 基因片段的原核表达及功能分析 32 HYPERLINK \l _bookmark25 1. 材料与方法 33 HYPERLINK \l _bookmark26 1.1 藻株与菌株来源及培养条件 33 HYPERLINK \l _bookmark27 1.2 海水小球藻 pepc2 基因保守序列片段克隆 33 HYPERLINK \l _bookmark28 1.3 大肠杆菌高效表达载体的构建 33 HYPERLINK \l _bookmark29 1.4 转化大肠杆菌 BL21(DE3) pLysS 33 HYPERLINK \l _bookmark30 1.5 IPTG（异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷）诱导原核表达载体表达 34 HYPERLINK \l _bookmark31 1.6 实时荧光定量 PCR 检测大肠杆菌 pepc 基因的表达率 34 HYPERLINK \l _bookmark32 1.7 大肠杆菌 PEPC 酶活性测定 34 HYPERLINK \l _bookmark33 1.8 大肠杆菌可溶性含量蛋白测定 34 HYPERLINK \l _bookmark34 1.9 大肠杆菌总油脂含量测定 34 HYPERLINK \l _bookmark35 1.10 大肠杆菌生长曲线的测定 34 HYPERLINK \l _bookmark36 2.结果 35 HYPERLINK \l _bookmark37 2.1 海水小球藻 pepc2 基因保守序列 I 片段的克隆与测序 35 HYPERLINK \l _bookmark38 2.2 大肠杆菌高效表达载体的构建 36 HYPERLINK \l