华北地区畜禽养殖粪便中抗生素抗性基因污染特征及碳氮相关性研究-环境工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 年 月 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年) 摘要 摘要 摘要 抗生素在畜禽养殖业中的大量使用导致抗生素抗性基因污染（ARGs）日益 严重，畜禽粪便和土壤逐步成为抗生素抗性基因重要的储存库，一旦进入环境 通过食物链传播，对人类健康带来严重威胁。因此展开畜禽环境中抗生素抗性 基因污染水平调查研究，分析抗生素抗性基因诱导影响因素刻不容缓。 本实验采取华北地区天津市和河北省不同类型、不同规模的养殖场粪便和 土壤样品，对 12 种四环素类、3 种磺胺类、2 种大环内酯类和 4 种喹诺酮类抗 性基因进行定性 PCR 研究，研究结果发现，四大类抗性基因在粪便和土壤中都 有检出，其中 6 种四环素抗性基因（tetH、tetL、tetM、tetO、tetW、tetX）、2 种磺胺类抗性基因（sul1、sul2）和 2 种大环内酯抗性基因（ermB、ermC）的 检出频率达到 100%，其他的抗生素抗性基因检出频率基本都在 80%以上。 对检出频率为 100%的 10 种抗生素抗性基因和 16s-rDNA 进行定量 PCR 检 测，结果发现河北省粪便中抗性基因的相对丰度高于天津市。粪便中大环内酯 抗性基因丰度整体最高，浓度基本保持在 10-3~10-1 之间，磺胺类抗性基因的相 对丰度为 10-4~10-1，且相对丰度 sul2sul1，而不同抗性机制的四环素抗性基因 相对丰度相差明显：编码核糖体保护蛋白基因（RPP）泵外排蛋白基因酶修 饰基因，变化范围为 10-5~10-1。土壤中抗生素抗性基因的浓度要低于粪便中抗 性基因污染水平。 不同类型的养殖场畜禽粪便中抗生素抗性基因浓度不同。磺胺类抗性基因、 大环内酯抗性基因和酶修饰基因 tetX 浓度对比：鸡粪猪粪，而 RPP 基因和泵 外排基因则相差不明显。 中型和小型养鸡场中抗生素抗性基因浓度相差不大，这可能与鸡场依赖抗 生素的程度有关。而不同规模养猪场中三大类抗生素抗性基因的浓度有明显区 别，趋势为：中型小型大型，说明规模越大的养殖场对抗生素的管理使用制 度越健全。 鸡粪和猪粪中抗生素抗性基因的浓度与有机碳（OC）的相关性不强，鸡粪 中只有 sul1 与有机碳显著相关（p0.05）；抗生素抗性基因与有机氮（ON）的 相关性较强，sul1，sul2，ermC，tetH 和 tetO 都存在显著相关性（p0.05），说 I 明抗生素抗性基因受有机氮的含量影响较大；OC/ON 与抗生素抗性基因的相关 性强于 OC 和 ON，磺胺类和四环素类抗性基因与其都存在显著相关性。 关键词：畜禽养殖场;粪便;土壤;抗生素抗性基因;有机碳;有机氮 II Abst Abstract Abstract There are increasing concerns about antibiotic resistance genes (ARGs) contamination because of extensive use of antibiotics in livestock and poultry breeding industry so that manure and soil become an important reservoirs for ARGs gradually.Great threat would be brought to public health once ARGs enter the environment and transmit through the food chain. It’s urgently necessary that an investgation consists of pollution level of