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人退变椎间盘内三种干细胞的生物学特性比较 中文摘要 人退变椎间盘内三种干细胞的生物学特性比较 中文摘要 目的比较来源于同一人退变椎间盘内髓核干细胞(NPSCs)、纤维环干细胞(AFSCs) 及软骨终板干细胞(CESCs)的生物学特性。 方法收集7 例经 X 线、MRI （核磁共振）确诊为椎间盘突出症患者，将取出的 椎间盘仔细分离并进行酶消化、滤网过滤后获得NPSCs 、AFSCs 及CESCs 。培养至 第3 代时，采用CCK-8 （细胞增殖与活性检测试剂盒）检测三种干细胞的生长活性， 并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化。诱导21d 后分别应用油红 O 染色检测细胞成 脂能力，茜素红染色检测细胞成骨能力，甲苯胺蓝染色检测细胞成软骨能力。提取第 3 代细胞总RNA ，分别行RT-PCR （实时定量逆转录-聚合酶链反应）检测成脂、成骨 及成软骨相关基因的表达情况。 结果来自于同一患者的NPSCs 、AFSCs 与CESCs 形态上相似，无明显差异。生 长曲线显示CESCs （第1、3、5、7、9、11、13、15 天OD 值分别为0.35±0.01，0.52±0.02， 0.64±0.08，0.80±0.19，0.79±0.2，1.06±0.11，1.37±0.09,1.31±0.41）与AFSCs （第1、 3、5、7、9、11、13、15 天OD 值分别为0.38±0.01，0.50±0.03，0.72±0.06，0.82±0.13， 0.87±0.08，0.87±0.09，1.20±0.05,1.43±0.05）增殖能力要比NPSCs （第1、3、5、7、 9、11、13、15 天OD 值分别为0.32±0.02，0.42±0.04，0.59±0.01，0.64±0.17，0.65±0.19， 0.68±0.21，0.67±0.12,0.59±0.12 ）活跃。油红O 染色、茜素红染色及甲苯胺蓝染色分 别证实三种干细胞均可向脂、骨及软骨三系诱导分化。RT-PCR 检测显示AFSCs 在成 脂(PPARγ 基因相对表达量 6.85±0.32，LPL 基因相对表达量 13.72±0.37)、及成软骨 (COII 基因相对表达量 10.45±1.10，SOX-9 基因相对表达量14.39±1.22)基因表达方面 比NPSCs （PPARγ 基因相对表达量6.63±0.50，LPL 基因相对表达量8.41±0.42；COII 基因相对表达量3.53±0.62，SOX-9 基因相对表达量7.66±0.68 ）与CESCs （PPARγ 基 因相对表达量 7.21±0.21，LPL 基因相对表达量 10.62±0.37； COII 基因相对表达量 8.26±0.49，SOX-9 基因相对表达量13.70±1.10）略强；而成骨能力方面，CESCs 最强 （RUNX-2 基因相对表达量 7.30±1.1 ，COI 基因相对表达量 8.22±0.84 ），AFSCs I 万方数据 中文摘要 人退变椎间盘内三种干细胞的生物学特性比较 （RUNX-2 基因相对表达量 6.20±0.92,COI 基因相对表达量4.94±0.90 ）与NPSCs 相 当（RUNX-2 基因相对表达量2.61±0.06 ，COI 基因相对表达量7.05±0.82 ；）；NPSCs 的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶(LPL)基因表达较低。 结论 NPSCs 、AFSCs 及CESCs 在体外培养中细胞形态相似，但生物学特性方面 存在着差异。体外诱导分化及RT-PCR 检测均提示AFSCs 比其他两种干细胞在椎间 盘组织工程领域中更加具有优越性。 【关键词】退变椎间盘；髓核干细胞；纤维环干细胞；软骨终板干细胞；生物学 特性