第5章核酸收的化学.pptVIP

第 五 章核酸的化学 Chemistry of Nucleic Acid 教学要求 主 要 内 容 核 素(nuclein) 除了上述五类基本的碱基外，核酸中还有一些含量甚少的碱基，称为稀有碱基。稀有碱基种类极多，大多数都是甲基化碱基。tRNA中含有较多的稀有碱基。 五种碱基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亚氨基的互变异构。这两种异构体的平衡关系受介质酸碱环境的影响。 生物的遗传信息贮存于DNA碱基序列中，生物界的多样性即寓于DNA分子中的4种脱氧核苷酸千变万化的精确排列顺序中。 基因的遗传信息的物质基础就是4种碱基的精确排列顺序。 可以通过测定DNA序列来研究DNA所载的信息及其功能。 1951年，Pauling提出了蛋白质的α-螺旋结构。 1952年，Wilkins和Franklin用高度定向的DNA纤维作出高质量的X-光衍射照片 1953年，Watson和Crick提出DNA的反向平行双螺旋模型 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 1. 右手螺旋 B-DNA: 相对湿度92%，钠盐—细胞内主要的存 在形式 A-DNA: 相对湿度75%，钠盐—转录时DNA-RNA 杂交 C-DNA: 相对湿度66%，锂盐—染色体及某些病 毒的DNA中 2. 左手螺旋 Z-DNA：常存在于基因的调控区域，可能与基因 的表达调控有关。 DNA多为线形，少数为环形。 当双螺旋的DNA分子与其他分子（特别是蛋白质）相互作用，使DNA双螺旋进一步扭曲时，就形成DNA的三级结构。 常见形式：超螺旋结构（superhelix structure） 正超螺旋— 拧紧状态 负超螺旋— 拧松状态（天然DNA主要以负超螺旋结构存在，以利于基因的表达） 基因和基因组 基因即一段有功能的DNA片段，生物细胞中DNA分子的最小功能单位（交换单位）。 一个细胞或生物体所含的全套基因称基因组。 RNA主要分为三种类型 转运RNA（ transfer RNA，tRNA）：在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸和识别密码子的作用。 核糖体RNA （ ribosomal RNA， rRNA） ：是核糖体的结构成分。核糖体作为RNA和蛋白质的复合物负责细胞内蛋白质的合成，是蛋白质合成的场所。 信使RNA（messenger RNA， mRNA ）：根据DNA上的遗传信息指导各种特异性蛋白质的生物合成。 一、tRNA的分子结构 1.分子量较小，占总RNA15%，由74～95nt组成; 2.分子中还存在一些稀有核苷，如二氢尿嘧啶核苷（DHU)、5-甲基胞嘧啶核苷（m5C）、假尿嘧啶核苷（ψ）。这类核苷大部分位于突环部分; 3. 3-末端都具有CCA序列，接受活化氨基酸; 4. 半数碱基可经过自身回折，形成局部双螺旋结构（“臂”），其间是单链形成的环状突起（“环”）。绝大多数tRNA经过这样的折叠形成四臂四环的特征性三叶草形的二级结构 。 二、mRNA的分子结构 mRNA是以DNA为模板合成的，携带着DNA的遗传信息，因此称为信使RNA。 mRNA是蛋白质合成的模板，决定着蛋白质中氨基酸的顺序。每种蛋白质多肽链都由一种相应的mRNA来编码，因此细胞内的mRNA种类很多，大小不一。 （一）原核细胞mRNA的结构特点 5-帽子结构的功能： 防止mRNA被核酸酶降解 为mRNA翻译活性所必需 与蛋白质合成的正确起始有关 分子大小：DNA Mr 106～1010或更大； RNA Mr 104～106或更大 dNMP平均分子量=330 u；NMP平均分子量=345 u) 在生物学界还常用碱基对（bp，base pair）来衡量核酸分子大小，千碱基对为kbp，或简写为kb（对于双链核酸）；对于单链核酸，kb指千碱基。 核酸电泳：可进行核酸的分离，判断核酸的纯度；测定分子大 小；估计核酸的构象。 1）琼脂糖电泳：适用于大分子核酸，一般用于DNA分析 2）聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分析RNA或Mr小于1000bp的DNA DNA的紫外吸收光谱 解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度对OD260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 四、核酸的分离纯化 2. DNA的分离纯化 五、核酸含量测定 1. 定磷法 2. 定糖法：核酸分子中含有核糖或脱氧核糖。具有特殊的呈色反应，据此可进行核酸的定量测定。 a. RNA中的核糖在浓硫酸或浓盐酸作用下脱水生成糠醛，糠醛与3，5-二羟基甲苯（苔黑酚或地衣酚）反应生成深绿色化合物，在660 nm下比色测定。测定范围为20~250 μg RNA。 b.