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定义与原理 ELISA又叫酶联反应，是一种免疫测定 。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 （1）酶联反应简介 在这种测定方法中有三个必要的试剂： 1、固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） 2、酶标记的抗原或抗体（标记物） 3、酶作用的底物（显示计） 可设计出各种不同类型的检测方法 ELISA检测法必要试剂 （1）酶联反应简介 常用ELISA类型 夹心法 竞争法 双抗体夹心法 双抗原夹心法 BH100检测原理为：双抗体夹心法 25-OH-维生素D3检测：竞争法 （1）酶联反应简介 竞争法：是利用待测抗原和酶标抗原与特异性抗体竞争结合，或待测抗体和酶标抗体与特异性抗原竞争结合而进行测定的一种方法 竞争法示意图 （2）维生素D3检测中竞争法应用原理 25-OH-VD3试剂盒（酶联免疫法-竞争法），定量测定人体血清中的25羟基维生素D3，校准品、质控品、样品均被样品稀释液稀释，稀释后的样品和辣根标记的25羟基维生素D3抗原在包被了鼠单克隆抗体的微孔中温育1小时后洗版，然后利用TMB显色。终止反应后利用酶标仪读取吸光度值。颜色的强度和25-OH-VD3的浓度成反比 。 北京博晖公司研发的25-OH-VD3试剂盒原理概述 （2）维生素D3检测中竞争法应用原理 * 2、维生素D3检测试验准备与流程 （1）BH公司VD3检测试剂盒 （2）自备材料与设备 （3）试剂准备 （4）维生素D3检测实验流程 25-羟基维生素D3检测试剂盒包含内容 材料 规格和装量 制备状态 主要组分 包被板 96人份/盒 48人份/盒 铝铂袋装 鼠单克隆抗体 定标血清 1瓶 1瓶 冻干粉 牛血清、25羟基维生素D3 质控血清 高中值各1瓶 高中值各1瓶 冻干粉 牛血清、25羟基维生素D3 样本稀释液 30ml 15ml 液体 磷酸盐 底物液A 7ml 4ml 液体 含过氧化氢 底物液B 7ml 4ml 液体 含四甲基联苯胺 酶工作液 7ml 4ml 液体 辣根酶标记的25羟基维生素D3抗原 终止液 7ml 4ml ------ 2M硫酸 洗板液 30ml 20ml 液体 吐温 磷酸盐 封口胶 2个 2个 ------ ------ 注：试剂盒在2-8摄氏度，有效期一年 （1）BH公司VD3检测试剂盒 0.5ml及以上的玻璃或聚丙烯微量离心管； 注意：聚苯乙烯试管不适合，不要重复使用试管。 高精度加样器（10ul、和200ul）以及对应枪头 旋涡震荡器； 自动洗板机（可选择）； 酶标仪和数据分析装置； 适用于具有450nm、630nm波长的所有全自动和半自动酶标仪 恒温培养箱或恒温水浴箱。 （2）自备材料与设备 定标血清和质控血清：定标血清和质控血清以冻干品的形式提供，使用前复溶于500ul蒸馏水中。盖紧瓶盖，室温下放置10-15min，期间颠倒摇晃几次，使其充分溶解，保存于2-8℃一周。 工作洗涤液：将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍后备用。 其他试剂直接使用- 所有试剂使用之前应该平衡至室温并反复颠倒混匀。 （3）试剂准备 临床表现 骨痛（腰背酸疼痛） 骨折 身高缩短，骨骼畸形 功能障碍（活动受限） （3）骨质疏松 骨质疏松常见骨折 椎体骨折 桡骨远端骨折 髋部骨折 肱骨外科颈骨折 38% 19% 19% （3）骨质疏松 防治药物 骨吸收抑制剂 骨形成促进剂 钙剂 氟化物 维生素D 甲状旁腺素 二膦酸盐 维生素D 降钙素 合成类固醇 雌激素 选择性雌激素受体调节剂 （3）骨质疏松 发病机理：血浆中25（OH）D3水平过高，而不是1,25（OH）2D3水平升高造成。高维生素D血症病人血中25（OH）D浓度可比正常个体高15倍，但是他们的1,25（OH）2D3水平没有显著变化。 短期多次大剂量维生素D治疗 维生素D预防剂量过大 误诊佝偻病错误治疗 * （4）维生素D中毒 诊断： 维生素D过量病史 早期血钙升高：高于3mmol/L X线检查：软组织钙化 * （4）维生素D中毒 二、维生素D检测指南与方法 1、维生素D检测指南 2、维生素D检测方法 1、维生素D检测指南 （1）维生素D缺乏诊断程序 （2）建议维生素D缺乏危险人群饮食补充维生素D （3）维生素D治疗和预防策略