抗生素备课小第四章菌种选育.pptVIP

第四章 菌种选育 利用工业微生物发酵生产的过程中，决定生产水平高低最主要的有三个方面的因素：生产菌种，发酵工艺和后提取工艺。其中最重要的是生产菌种。 菌种选育的最初目的是改良菌种的特性，使其符合工业生产的要求。 菌种选育的目的 菌种选育的基本内容 根据菌种自然变异而进行的自然选育，以及用人工方法引起菌种变异或形成新的杂种，再按照工业生产的要求进行筛选来获得新的变种或杂种。 菌种选育技术 自然选育、诱变育种等方法属于经验育种的范畴 ； 原生质体技术、杂交育种、分子生物学方法等现代菌种选育技术。 第一节 自然选育 自然选育 是一种纯种选育的方法。它利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过分离，筛选排除衰退型菌株，从中选择维持原有生产水平的菌株。 一、自然选育的目的 1.纯化菌种 2.防止菌种衰退 3.稳定生产 4.提高产量 一、菌种退化与变异原因 1．菌种遗传特性的改变 （1）遗传基因型的分离 异核体现象 （2）自发突变（回复突变） 自发突变的原因： ①用沙土管等长期保藏； ②菌种连续传代，这种自发突变比保藏过程中产生的比例要高； ③活细胞内进行的新陈代谢活动，能产生一些具有诱变作用的物质，当这些物质在胞内累积到一定浓度时能诱发DNA结构的改变。 ④DNA中存在的增变基因也能诱发基因突变。 ⑤有的微生物的染色体上还存在有导致菌体退化的死亡基因，DNA的代谢失调也会引起基因突变而造成菌种退化。 ⑥多因素低剂量的诱变效应 ⑦互变异构效应 2．经诱变剂处理后的退化变异 ①初筛出的菌落可能是由成对或成堆孢子发育成的，其中只有一个细胞诱发了基因突变，在传代中细胞核分裂时，未发生基因突变的细胞逐渐在数量上占优势，便表现出产量下降。 ②可能是诱变菌种的细胞是异核体，而发生基因突变的只是其中一个细胞核的遗传基因。那么在传代过程中由于产生细胞核的分离现象，高产突变基因的核在数量上失去了优势，便出现产量性状的退化变异。 ③突变发生在无意义链上，在遗传信息传递过程中被丢失，致使正突变性状的消失。 ④在诱变剂的作用下，被诱变菌种出现基因混杂，突变的高产基因虽然已经传递到下一代，但在传代使用过程中，当环境条件适合于低产型突变株繁殖时，使其在数量上占优势，便表现出低产水平。 3.菌种生理状况的改变 （1）一个菌种不是一个单一的群体，而是由一些变株混合而成的，这些变株所占的比例决定该菌种的特性。 （2）菌种培养基的影响。 （3）在某些培养条件下，菌体的某些基因处于活化状态或阻遏状态，而使得菌种的生理状态改变。 二、自然选育的方法 1. 单孢子悬浮液的制备 定量稀释后制成50～200个单细胞／ml的菌悬液 2. 分离及单菌落培养 根据计数结果，按丝状真菌、放线菌菌落大小不同，分离量以5～20个菌落／平皿为宜。 3．筛选 将分离培养后的各型单菌落，接斜面培养，成熟后接入发酵瓶，测定发酵单位的过程称为筛选。它分初筛、复筛两个过程。 初筛系指初步筛选，以多量筛选为原则。 复筛是对初筛得到的高产菌株的复试，以挑选出稳定高产菌株为原则。 初筛、复筛都要同时以生产菌株作对照。复筛选出的高单位菌株至少要比对照菌株产量提高5％以上，并经过菌落纯度、摇瓶单位波动情况，以及糖、氮代谢等的考察，合格后方可在生产罐上试验。复筛得到的高单位菌株应制成沙土管、冷冻管或液氮管进行保藏。 第二节 诱变育种 通过诱变剂处理就可以大大提高菌种的突变频率，扩大变异幅度，从中选出具有优良特性的变异菌株，这种方法就称为诱变育种。 诱变育种的特点：具有速度快、收效大、方 法简便 ；但是诱发突变缺 乏定向性、工作量大。 诱变育种工作主要包括出发菌株的选择、诱变处理和筛选突变株三个部分。 一、诱变剂的种类 1.物理诱变剂 紫外线、快中子、X射线、r-射线、激光 2.化学诱变剂 （1）碱基类似物：5-Bu （2）与碱基起反应的物质：亚硝酸、氮芥、 羟胺、硫酸二乙酯、NTG（N-甲基-N-硝基- N-硝基胍） （3）丫啶类 3.生物诱变剂：噬菌体 二、突变诱发过程 前突变 ：诱变剂所造成的DNA分子的某一位 置的结构改变称之。 前突变可以通过影响DNA复制而成为真正的突变，也可以经过修复重新回到原有的结构，即不发生突变。 （一)诱变剂接触DNA分子前 1.细胞对诱变剂的透性将影响诱变效果。 2.细胞质的某些组分和某些酶可和诱变剂相 互作用而影响诱变效果。 3.与基因所处的状态有关，而基因的状态又 和培养条件有关。 (二)DNA损伤的修复 微生物有五种方式来修复DN