蛋白质不化学-.ppt

第一章 蛋白质化学;蛋白质 是由许多不同的α-氨基酸按一定的序列通过酰胺键（肽键）缩合而成的，具有较稳定的构象并具有一定生物功能的大分子。;蛋白质的生物学意义;第一节 蛋白质的元素组成;第二节、蛋白质的氨基酸组成;（一）氨基酸的结构通式（组成蛋白质的20种）： 19种氨基酸具有一级氨基（-NH3+）和羧基（-COOH）结合到α碳原子（Cα），同时结合到（Cα）上的是H原子和各种侧链（R基）； 另一个氨基酸Pro 具有二级氨基（α-亚氨基酸）;不带电形式;（二）氨基酸的分类(蛋白质氨基酸-20种);根据R的极性 （1）极性氨基酸： 1）不带电： Gly、 Ser、Thr、Asn、Gln、Tyr、Cys； 2）带正电：His、Lys、Arg (碱性氨基酸) 3）带负电：Asp、Glu (酸性氨基酸) （2）非极性氨基酸：Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Met、Pro、Trp;中性氨基酸;;;;;;;根据营养分类 必需氨基酸：Leu Trp Met Lys Val Ile Phe Thr 半必需： His Arg 非必需氨基酸：; 非蛋白质氨基酸：鸟氨酸 瓜氨酸;（三） 氨基酸的构型、旋光性和光吸收 ; 如含两个手性碳原子，则有４种立体异构体，分别称为Ｄ-,Ｌ-，Ｄ别-和Ｌ别-氨基酸。 ;旋光性：;光吸收：;组成蛋白质的氨基酸中，Trp、Tyr和 Phe对紫外光有一定的吸收，这是因为它们分子中含有苯环，是苯环的共轭双键造成的;;（四）氨基酸的重要理化性质;两性解离和等电点 氨基酸在水溶液中或在晶体状态时都以离子形式存在，在同一个氨基酸分子上带有能放出质子的—NH3+正离子和能接受质子的—COO-负离子，为两性电解质。;调节氨基酸溶液的pH，使氨基酸分子上的—+NH3基和—COO-基的解离程度完全相等时，即所带净电荷为零，此时氨基酸所处溶液的pH值称为该氨基酸的等电点（pI）。 ;当溶液的 pH = pI时，氨基酸主要从两性离子形式存在。 ;氨基酸等电点的确定(以甘氨酸为例);根据pK值（该基团在此pH一半解离）计算： 等电点等于两性离子两侧pK值的算术平均数。;谷氨酸;酸性氨基酸，以Asp为例：;碱性氨基酸，以Lys为例：;3. 化学性质;（2）与2,4-二硝基氟苯(DNFB)的反应—sanger反应;（3） 与苯异硫氰酸（酯）的反应 (Edman反应 );PITC;1．离子交换层析法 ;离子交换树脂： ;例题： 利用阳离子交换层析分离下列每一对氨基酸，哪一种氨基酸首先被 pH7 缓冲液从离子交换柱上洗脱出来。 （a）Asp和Lys（b）Arg和Met（c）Glu和Val ;第四节 肽（peptide） ;二肽 三肽 四肽 ;氨基酸之间通过肽键连接形成的链称肽链。 ;命名：根据氨基酸组成，由N 端→C 端命名 ;（1）谷光甘肽（GSH）; 由于肽中N 端自由氨基和C 端自由羧基之间的距离比氨基酸中的大，因此它们之间的静电引力较弱。;肽的等电点定义：肽所带净电荷为“零”时，溶液的pH值。 ;; 今有一四肽 甘氨酰谷氨酰赖氨酰丙氨酸,其pKα-COOH=3.7, pKα-NH2=7.8, pK侧链COOH=4.6, pK侧链NH2= 10.2 求该四肽的等电点? ;2．肽的化学性质 ;蛋白质分子结构：; 蛋白质的一级结构又称初级结构，二级结构、三级结构、四级结构的三度空间排列称蛋白质的空间结构/高级结构/三维结构或构象。 ;（一）蛋白质的一级结构（化学结构）;HPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His- Leu-Val- Glu- Ala- Leu- Tyr –Leu -Val-Cys-Gly-;原则：将大化小，逐段分析，制成两套肽片段，找出重叠位点，排出肽的前后位置，最后确定蛋白质的完整序列。;序列测定前的准备工作：;（1）末端分析：包括N端分析，C端分析;（1）末端分析：包括N端分析，C端分析 ;N端氨基封闭的几种情况 ;C端分析 ;（2）肽链的拆开和分离 ;（3）肽链的部分水解 ;酶解方法;氨基酸序列测定:;（5）找重叠肽从而推断整个肽链的氨基酸序列 ;例子: 氨基末端 H 羧基末端 S;二硫键位置的确定 ; 近年来由于DNA序列的测定发展很快，可将相应于蛋白质的DNA序列测定出来后，推出蛋白质的序列，为蛋白质一级结构的测定带来了新的曙光。 ;HPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His- Leu-Val- Glu- Ala- Leu- Tyr –Leu -Val-Cys-Gly-;（二）蛋白质的空间结构（构象、高级结构）; 早在20世纪