厚朴抗氧化活性成分的提取分离及其抗氧化活性测试研究分析-化学专业论文.docxVIP

Extraction and Separation of Effective Components from Magnolia Officinalis and Their Antioxidant Activities Study A Thesis Submitted toChongqingUniversity in Partial Fulfillment of the Requirementfor the Master’s Degree ofScience By Fan Qi Supervised by Prof. Xu Yi Specialty：Chemisty College of Chemistry and Chemical Engineeringof ChongqingUniversity, Chongqing, China May2014 中文 中文摘要 重庆大 重庆大学硕士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘 要 厚朴药材是木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮，属重庆道 地药材。厚朴中主要含有挥发油、木脂素类、生物碱类、多糖类等化学成分，具 有抗菌、抗炎等药理作用，具有一定的研究价值。目前，对厚朴的研究主要集中 在木脂素类成分厚朴酚、和厚朴酚的提取工艺及抗菌等药理作用，对厚朴中其他 活性成分及生物活性研究甚少。因此，本论文主要针对厚朴药材中的活性成分木 脂素类、生物碱类、多糖类成分进行提取分离，并对分离制备的厚朴提取物、厚 朴活性成分及其有效成分的抗氧化活性进行评价，为厚朴药材的进一步开发利用 提供科学依据；利用耗样量低、集成化的微流控技术，结合化学发光抗氧化体系 反应过程及原理，搭建微流控化学发光检测系统，用以药物的抗氧化性评价，实 现天然产物抗氧化成分的快速筛选。 本文的主要研究工作及结果包括： 1. 以厚朴药材具有抗氧化活性的成分及化合物为目标，采用不同溶剂体系提 取制备得到厚朴水提物、60%乙醇提取物、80%乙醇提取物，采用 HPLC 法及 Folin -Ciocalteu 法测定其厚朴酚、和厚朴酚含量及总酚含量，初步了解提取物中物质组 成情况及其抗氧化活性，其中，80%乙醇提取物中厚朴酚、和厚朴酚含量最高，分 别为 209.4 mg/g、159.8 mg/g，总酚含量为 228.3mg GAE/g。进而，从提取物中分 离得到厚朴中木脂素、生物碱、多糖三类活性成分作为后续抗氧化活性测试样本。 采用水提醇沉法制备厚朴粗多糖，苯酚-硫酸法测定其含量为 50.8%；采用有机溶 剂提取法制备厚朴总生物碱，酸性染料比色法检测其含量为 63.8%；采用大孔树脂 吸附技术分离制备厚朴木脂素，显色法测定其含量为 87.2%。采用紫外分光光度法， 实现对厚朴药材中厚朴酚、和厚朴酚的含量进行同时测定，检测结果略低于 HPLC 法测定结果，可用于厚朴药材有效成分的初步判断。以 80%乙醇为溶剂对厚朴进 行提取后，采用有机相萃取，并利用硅胶柱层析、薄层色谱法、重结晶等技术对 乙酸乙酯萃取部分进一步分离纯化，制备得到厚朴中的有效成分厚朴酚、和厚朴 酚，并采用紫外、高效液相、核磁共振等技术对其纯度、结构做鉴定，纯度分别 达到 97.14%、92.93%。将制备所得的厚朴的水提取、60%乙醇提取物、80%乙醇 提取物三种提取物，厚朴中粗多糖、总生物碱及木脂素三种活性成分，以及厚朴 中的有效成分厚朴酚、和厚朴酚两种单体化合物作为后续抗氧化活性测定的样本， 为厚朴抗氧化活性成分的确定奠定物质基础。 2. 采用邻苯三酚-鲁米诺体系、过氧化氢-鲁米诺体系、Fe2+-过氧化氢-鲁米诺 体系三种化学发光体系对制备的厚朴水提物、60%乙醇提取物、80%乙醇提取物、 厚朴粗多糖、厚朴总生物碱、厚朴木脂素、厚朴酚、和厚朴酚七种样本对超氧阴 离子（O2-?）自由基、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（?OH）的清除能力进行测定， 并以抗坏血酸作为阳性对照物，计算得到不同样本对不同自由基的半数抑制浓度 IC50 值，用以评价各成分抗氧化活性。结果表明：厚朴各成分均对三种自由基有一 定的清除作用，其中，对过氧化氢（H2O2）自由基的清除能力最强，且强于阳性 对照物。另外，厚朴水提物、60%乙醇提取物、80%乙醇提取物抗氧化活性大小依 次为：80%乙醇提取物60%乙醇提取物水提物；厚朴粗多糖、总生物碱、木脂素 抗氧化活性依次为：总生物碱木脂素粗多糖；就厚朴中两种有效成分而言，和 厚朴酚对三种自由基的清除能力远远强于厚朴酚，也强于阳性对照物。结果表明， 厚朴中成分大多具有良好的抗氧化活性，具有一定的研究及利用价值。 3. 根据化学发光反应原理及反应过程，设计并制作了集成八个检测通道于一 体的微流控化学发光芯片，该芯片具有结构简单、耗样量小