亲水相互作用色谱方法开发和故障排除-Agilent.PDF

技术概述 亲水相互作用色谱方法开发和 故障排除 前言 亲水相互作用色谱 (HILIC) 是高效液相色谱 (HPLC) 领域中一种快速发展的色谱技 术。即使是强极性的化合物也能通过 HILIC 使用与反相 HPLC 相同的系统和溶剂实现 分离。 相比传统技术（如衍生化、离子交换、离子对和正相 HPLC），HILIC 大大降低了极 性分析的成本和工作量。然而，即便对经验丰富的色谱工作者来说，HILIC 的方法开 发和故障排除仍然是一项挑战。直到最近，HILIC 色谱柱才有了和成熟的反相键合相 相媲美的性能和重现性。 本技术概述介绍了 HILIC 的基本原理和方法开发，并在最后对故障排除进行了 总结。 了解 HILIC 和极性分析 弱极性溶剂 强极性溶剂 B） （流动相 A） （流动相 HILIC 的色谱柱分析可保留中极性至高极性的化合物。此范围 THF 丙酮 乙腈 IPA 乙醇 甲醇 H O 的化合物与反相 HPLC 中的 C18 柱略有重叠，后者可保留中 2 极性至非极性的化合物。 图 1. 溶剂极性强度 HILIC 固定相具有强极性和亲水性，可吸收流动相中的水分， 请注意，与反相 HPLC 不同，对大多数 HILIC 分离来说，纯甲 在其表面形成薄薄的水层。根据具体的固定相，形成该水膜需 醇 (MeOH) 的溶剂极性太强。乙腈 (ACN) 是推荐常用的弱极 要大约 3% 的水。增加流动相的含水量会降低分配效应，当流 性溶剂，加入醇类物质可以增加缓冲液溶解度或稍微改变选 动相含水量约为 50% 时，分配效应将完全消失。此时，HILIC 择性。 将不再保留化合物。 极性化合物技术― HILIC 与其他方法的对比 HILIC 的流动相为极性更强的溶剂，这与反相 HPLC 相反。其 极性化合物的分析方法有很多种。不同的方法有其各自的优点 中水是极性最强的流动相，其次是甲醇。图 1 所示为极性强 和缺点，如表 1 所示。 度递增的溶剂列表。缓冲盐也可增加溶剂强度，但并不明显。 相比之下，HILIC 是一种强大且灵活的技术，如表 2 所示。 表 1. 传统技术的优缺点 技术 优点 缺点