第十一章流模拟酶核酶极端酶.pptVIP

2.剪切型核酶 这类RNA进行自身催化的反应是只切不接。1）自体催化剪切型 剪切机制 转酯化过程： 由靠近切割位点3‘端的2’OH或氧原子对切割位点的磷原子实施亲核攻击，产生5‘-OH 和2’，3‘-环磷酸二酯。 剪 切 机 制 核酶自身剪切反应 锤头型核酶的二级结构 和空间立体结构示意图 三个双螺旋区。 13个核苷酸残基保守序列。 剪切反应在右上方GUX序列的3‘端自动发生。 发夹（hairpin ）结构 1989年汉普（Hample）研究烟草环斑病毒（sTRSV）的负链RNA的自我剪切反应，提出发夹结构（hairpin structure）模型。 发夹核酶结构模型 四个螺旋区、三个连接区和两个环。 剪切反应发生在底物识别序列GUC的5‘端。 5‘ 3‘ 发夹二级结构模型 剪切位点 2) 异体催化剪切型 核糖核酸酶P(RNaseP)是内切核酸酶，是核糖核酸蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH 和 5’-磷酸末端。 RNaseP由M1RNA和蛋白质亚基组成。 携带氨基酸 辨认并结合氨基酰tRNA合成酶 识别mRNA上的密码 识别并结合核蛋白体 氨基酸臂 DHU臂 反密码臂 可变臂 T?C臂 三、核酶的应用 1. 基础理论：生命起源的探索 2. 医药： 1）通过识别特定位点而抑制目标基因的表达，抑制效率高，专一性强。如抗肝炎病毒、抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV- Ⅰ)、抗肿瘤。 2）免疫原性低，很少引起免疫反应。 3. 植物抗病毒 四、核酶面临的问题 1、核酶催化效率低。 2、核酶本身是RNA，很容易被核酸水解酶 RNase破坏。 五、影响核酶活性的因素 1、pH值对活性的影响： pH7.0- 7.5时核酶活性最高。 2、二价金属阳离子对活性的影响: Mg2+ Mn2+ 3、抗生素对活性的影响：大多数为抑制效应 4、变性剂对活性的影响: 5、温度对活性的影响: 1、极端微生物和极端酶 极端微生物： 又称嗜极菌（extremophiles），是在超常生态环境条件下生存的微生物。 11.3 极端酶（extremozyme） 根据所耐受的环境条件不同，分为： 嗜热菌（thermophiles） 超嗜热菌（hyperthermophiles） 嗜冷菌（psychrophiles） 嗜盐菌（halophiles） 嗜酸菌（acidophiles） 嗜碱菌（alkaliphiles） 嗜压菌（barophiles） 抗辐射的微生物 2. 极端酶的制备 1）天然极端酶的筛选和生产 2）蛋白质工程生产极端酶 * 对任何化学反应，反应物在变为产物之前，必须获得一定的能量，成为活化态或称过渡态。过渡态处于最高能阶上。 过渡态与反应物的能阶之差称为活化能。 获得活化能的多少与反应的速度成正比。 过渡态理论是解释酶催化原理的经典理论。 过渡态理论 过渡态理论认为，酶与底物的结合经历了一个易于形成产物的过渡态，实际上是降低了反应所需的活化能。 过渡态理论 与反应过渡状态结合作用 在酶催化的反应中，与酶的活性中心形成复合物的实际上是底物形成的过渡状态， 酶与过渡状态的亲和力要大于酶与底物或产物的亲和力。 1969年Jencks根据抗体结合抗原的高度特异性，与天然酶结合底物的高度专一性相类似的特性，在过渡态理论的基础上首先提出设想： 能与化学反应中过渡态结合的抗体，可能具有酶的活性，催化反应的进行。 1986年Lerner和Schultz证实了这一设想。 抗体酶设想 抗体酶的发现 Lerner和Schultz分别领导各自的研究小组首次观察到了抗体具有选择性的催化活性。 1986年美国Lerner和Schultz两个实验室同时在Science上发表论文，报道他们成功地得到了具有催化活性的抗体。 并将这类具催化能力的免疫球蛋白称为催化抗体，即抗体酶。 1986年Schultz以对硝基苯酚磷酸胆碱酯（PNPPC）作为相应的羧酸二酯的过渡态类似物。 诱导产生的抗体酶使水解反应速度加快12000倍。 抗体酶 抗体酶（Abzyme）或催化抗体（Catalytic antibody)是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物。 本质上是一类具有催化活力的免疫球蛋白，在其可变区赋予了酶的属性。