双孢蘑菇耐热分子机理研究及相关基因的克隆与功能验证-分子微生物学专业论文.docxVIP

摘要成酶基因(Pab)、脯氨酸顺反异构酶基因(Ppi)、疏水蛋白基因(Hpb)和Calnexin 摘要 成酶基因(Pab)、脯氨酸顺反异构酶基因(Ppi)、疏水蛋白基因(Hpb)和Calnexin 基因，在反向遗传学研究中，我们发现抑制疏水蛋白基因(Hpb)表达起到了明显 的降低叩菌株耐高温特性的作用，反向的结果印证了Hpb基因在促进双孢蘑菇 以高温耐受性上的突出作用；拟南芥中的表型功能验证显示Pab、印f、Hpb以 及一种免疫调节蛋白能够显著增强野生型拟南芥幼苗的基础耐温性。 我们在拟南芥中研究了PABA合成酶的耐高温机制。在表型上，外源直接添 加PABA(1．5 rtmoVL)f毙够直接促进拟南芥的耐温性；同时，内源过表达PABA 合成酶的转基因植株(35S：AbPabase)的基础耐温性也明显优于野生型植株。通过 深入研究，我们发现热激能够促进拟南芥H202产生，同时转基因植株 (35S：AbPabase)中的本底H202水平显著高于野生型。此外，转基因植株 (35S：AbPabase)中热休克蛋白表达水平也显著上调，这一现象同样出现在生长于 外源添加PABA(5 umot／L)的野生型拟南芥小苗中。从以上结果中，我们认为在 担子菌和高等植物中存在着一条“PABA—H202．Peroxide signaling—HSPs expression-Thermotolerance”的信号转导通路。在这个通路里，PABA作为一个信 号分子介导了H202累积，适量浓度的H202能作为第二信使，激活过氧化感受的 信号转导通路，通过蛋白激酶的磷酸化作用逐渐使信号放大，信号入核促进了热 休克蛋白和耐高温相关的功能基因的过表达，最终提高了生物体的耐温性。PABA 信号通路的提出不仅丰富了我们对耐高温信号转导的认识，而且它也是对水杨酸 信号通路最有力的支持和补充。 关键词： 高温胁迫，高温耐受性，双孢蘑菇，抑制性消减杂交，疏水蛋白，对 氨基苯甲酸合成酶 X AbstractAbstract Abstract Abstract Heat stress is one type of abiotic stress，which caused by high environmental temperature beyolld optimum．Heat stress could disturb the cellular homeostasis of organisms，leading to sever stagnation in growth，development,and even death．As the global climate getting warmer,heat stress becomes the main cause for the great reduction in agriculture and breeding．In this dissertation,we investigate the injuries caused by heat stress in the mushroom Agaricus bisporus，as well as the innate heat stress response and resistance mechanisms．Additionally,we investigate how to breed thermotolerant mushroom strain witll molecular biology and genetic engineering． Agaricus bisporus is a kind of edible mushroom with high ecological and economical values．Environmental temperature is the key restriction factor in its cultivation．Breeding a thermotolerant strain will eventually benefit its yield．A． bisporus 8213 is a common cultivated strain that could only be cultivated under 1 6—22C，while its phylogenetically closest strain 02 exhibited evident thermotolerance谢廿l healthy mycelium morphology above 33C，such temperature would be、ethal