地榆总皂苷促血小板生成作用及其机理研究-中药学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 成都中医药大学 2014 届硕士学位论文 摘要 目的：探讨地榆总皂苷的促血小板生成作用及其对血小板生成起重要调控作 用的靶点 TPO/c-mpl 及 SCF/c-kit 的影响，以明确地榆总皂苷促血小板生成作用 的机理。 方法：通过体外及体内实验研究了地榆总皂苷的促血小板生成作用及其机 理，体内研究方法：采用环磷酰胺造成小鼠血小板减少症动物模型的方法，于造 模的同时给予地榆总皂苷（1，0.5，0.1mg/kg）溶液进行治疗，于造模后第 4、7、 10 天眼丛取血测定小鼠外周血象指标。体外研究方法：①MTT 法检测地榆总皂 苷对 TPO 依赖性 Baf3/Mpl 细胞增殖水平的影响。②CCK8 法检测地榆总皂苷对 IL-3 依赖性 Baf3 细胞增殖水平的影响。③CCK8 法检测地榆总皂苷对 IL-3 依赖 性 32D 细胞增殖水平的影响。④Giemsa 染色法检测地榆总皂苷对 32D 细胞形态 学的影响。⑤RT-PCR 法检测地榆总皂苷对 Baf3/Mpl 细胞中 TPO 受体 mRNA 表 达水平的影响。⑥RT-PCR 法检测地榆总皂苷对 32D 细胞中 c-kit mRNA 表达水 平的影响。⑦荧光探针法检测地榆总皂苷对 HEL 细胞中 c-kit mRNA 表达水平的 影响。 结果：体内实验结果：地榆总皂苷能显著的升高造模后小鼠的白细胞、红细 胞及血小板水平。体外实验结果：①在不含 TPO 的培养条件下，Baf3/Mpl 细胞 增殖明显受抑制；在含 TPO 的培养条件下，Baf3/Mpl 细胞增殖明显；当同时加 入 TPO 和质量浓度为 10μg/ml 的地榆总皂苷后，细胞增殖更为明显，且优于 TPO 单独处理组；在不含 TPO 培养条件下，地榆总皂苷单独处理细胞，也能明显促 进细胞增殖。②在不含 IL-3 的培养条件下，Baf3 细胞增殖明显受抑制；在含 IL-3 的培养条件下，Baf3 细胞增殖明显；当同时加入 IL-3 和质量浓度为 10μg/ml 的 地榆总皂苷后，细胞增殖更为明显，且优于 IL-3 单独处理组；在不含 IL-3 培养 条件下，地榆总皂苷单独处理细胞，也能明显促进细胞增殖，且呈时间依赖。③ 在缺乏 IL-3 培养条件时，细胞增殖明显受抑制，但在含 IL-3 的培养条件下，32D 细胞增殖明显；在不含 IL-3 的培养条件下加入质量浓度为 10μg/ml 的地榆总皂 苷后，细胞数量明显增加，并呈时间依赖。④质量浓度为 40μg/ml 的地榆总皂苷 单独处理 32D 细胞 4 天后，多倍体巨核细胞数量增加，且胞体变大；当培养时 I 间延长至 9 天时可明显诱导多倍体巨核细胞数增加，促进巨核细胞成熟分化。⑤ 质量浓度为 10μg/ml 的地榆总皂苷单独处理细胞 48h 能明显上调 Baf3/Mpl 细胞 中 TPO 受体 mRNA 的表达水平。⑥质量浓度为 10μg/ml 的地榆总皂苷单独处理 细胞 48h 能明显上调 32D 细胞中 c-kit mRNA 的表达水平。⑦质量浓度为 20μg/ml 的地榆总皂苷单独处理细胞 48h 能明显上调 HEL 细胞中 c-kit mRNA 的表达水 平。 结论：地榆总皂苷具有明显的促血小板生成作用，其作用机制与上调 TPO 受体及 c-kit 的表达水平有关。 关键词：地榆总皂苷；血小板生成；TPO 受体；c-kit；增殖；分化 II 成都中医药大学 2014 届硕士学位论文 Abstract Objective：To investigate the thrombopoietic effects of total saponins from sanguisorba officinalis and the effects on three important targets: TPO/TPOR、 IL-3/IL-3R 、 SCF/c-kit, which clears the mechanism of total saponins from sanguisorba officinalis’ thrombopoietic effects. Methods：Studied the thrombopoietic effects and mechanism of total saponins from sanguisorba officinalis L(TSSO) by both in vitro and in vivo experiments. In vivo tests included: Mouse were injected to cyclophosphamide to establish the animal model of