HPLC样品前处置技术.ppt

高效液相色谱样品前处理技术 在做样品之前首先要知道样品大致情况是纯品还是粗品，如果是粗品是哪一类的原料。 要了解待测组份的性质和化学结构，才能够为样品的前处理和色谱条件的选择打基础。 上机分析之前 ，准备好样品、选择好色谱条件、保证仪器正常运行。 注：样品在上机分析之前一定要过滤 流动相要过滤、脱气 在复杂基体中低浓度有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战．虽然分析仪器的自动化程度日益提高，但在发展分析方法的同时，人们或多或少忽视了样品的预处理问题。 然而在分析复杂样品，如生物样品、环境样品、植物样品等，为了获得比较可靠的鉴定结果,必须花费很多的人力和经费，并且由于前处理步骤多，如果前处理不当，往往会使全过程的回收率降低，会发生定性定量错误和色谱柱寿命缩短等问题．因此，提高和掌握样品的前处理技术是完善检测全过程的重要环节。 目前仍沿用溶剂提取、色谱分离或液-液分配等纯化方法。 样品预处理的内容繁多，如 液体样品： 直接上机、稀释、富集、抽提、离心、 过滤后上机 固体样品：溶解、离心、萃取 生物样品（如，血液、尿液、动物组织及器官等样品）：预处理 一般说来，样品预处理要达到的目标如下： 1．去除基体中干扰样品分析的杂质，提高分析精度和分离效果； 2．提高被测定化合物检测灵敏度； 3．提高样品与流动相的兼容性，从而改善 定性定量分析的重复性． 高效液相色谱分析样品时没有统一的前处理方法。必须根据样品的种类和待测项目决定前处理方案，但原则上仍应考虑几下操作环节： 如取样、试样的调制、提取、纯化、浓缩等步骤， 至于各种具体样品的前处理可以进一步参考有关资料。 （一）取样与调制 固体块状样品的取样与调制 为了得到较为可靠的结果，取样的代表性极为重要。一般取样操作要点可概括为： 第一步随机抽样，抽样量要根据样品数量而定， 第二步再按四分法将试样缩分到所需的量， 第三步再取所需的量。样品得到后必须进行粉碎和混匀， 小量样品可以使用研钵，较多的试样可使用电动 粉碎机粉碎。粉碎后，应通过20一30目筛孔用筛过筛，混合均匀，制得试样。 当试样含水分较多而较难粉碎时，特别是待分析的成分不会因干燥而发生变化时，需进行予干燥。一般将已粉碎的试样置于60℃烘箱中烘1—2小时，称取干燥前后的重量，分析维生素类的物质时通常不进行予干燥。 当待测成分会因干燥而分解时，只能将原样进行研磨，或加适量溶液研磨，使其成为均匀的分析试样。水果等样品可使用研钵。 鱼肉等样先用小刀切成小块后，用绞肉机绞碎。 水果糖等样，能简单溶于水或适当的溶剂，可制成溶液，搅拌匀。 油脂类也能一次性溶解，使其成为溶液、混匀。 牛奶等，因比重不同，溶液上下不均匀，这时可将玻璃管插到底部，在所有的层次取样，或者用搅拌棒搅匀，取其搅匀的样品。 啤酒、汽水等含碳酸的饮料，在20一25度加热，完全逐出碳酸后再进行分析。 贝壳类除去壳，仅将贝肉磨碎。 干鱼可直接粉碎制备试样。  （二）提取方法 提取方法： 液-液萃取 液-固萃取 超声波萃取 微波萃取 膜技术：微渗透 超滤膜技术 从技术角度而言．植物及食品样品分析最为困难的是：待测成分从样品基体中将其分离。 目前，常用的提取分离方法仍采用溶剂提取法． 选择提取溶剂时，应考虑到： 1、提取溶剂是否会与待测成分发生反应； 2、欲分析物质的极性； 3、欲分析物质在不同溶剂中的溶解性； 4、欲提取样品的类型(含水多、含油多、干材等）； 5、溶剂的毒性； 6、溶剂的挥发性 7、溶剂的纯度； 8、溶剂的价格等。 一般亲水性溶剂应用于提取亲水性化物， 而疏水性溶剂最适宜提取脂溶性和油溶性化台物。 欲分析物质在溶剂中的溶解度是选择最适宜溶剂时的另一个重要因素。 不同类型的样品需要不同的溶剂。一般用水溶性溶剂提取含水量高的样品。 而用乙腈提取脂溶性或油溶性样品。 氯仿和二氯甲烷是提取干性材料的最适宜溶剂。 如果有多种溶剂都适用于提取，那么应该首先选用毒性最小的溶剂以保护分析人员的身体健康。 在控制监测中，当被测成份和样品类型已知时，理论上可选择最合适的溶剂。 根据样品类型和被测成份种类使用不同方法进行提取。 在实际工作中最广泛使用的提取溶剂有： 二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、乙酸乙脂、 苯、乙醇、甲醇、石油醚、已烷等或它们 的混合剂。 在此基础上可以得知有广泛适用性的使用方案(溶剂／样品／化合物基体) 1、液—液分配法提取样品 。 采用液—液分配法可把不同溶解度的化合物分开。正确选择萃取溶剂即可把被测成份萃取出来，使其与大多数共萃物分开， 色谱分离情况与样品