千颗一粒：微纳米材料普遍的自噬效应-化学生物学专业论文.pdf.docxVIP

目录摘要 目录 摘要 ．I Abstract ． ． III 第一章绪论 1 1．1自噬介绍 ．1 1．1．1自噬是依赖于溶酶体的自我吞噬过程 1 1．1．2自噬是真核生物共同的降解机制 1 1．1．3巨自噬是主要的自噬类型 1 1．1．4自噬发生的过程 2 1．1．5哺乳动物中自噬的信号通路调控 3 1．1．6自噬研究的方法 4 1．1．7自噬是维持细胞内稳态的机制 5 1．1．8白噬与人类的健康和疾病 6 1．1．9自噬调控在疾病治疗中的作用 6 1．1．10自噬研究的发展历史与现状 ．．7 1．2纳米材料及其生物效应 ．8 1．2．1磁性氧化铁纳米材料 8 1．2．2纳米金 ．．11 1．2．3纳米二氧化硅 ．．11 1．2．4影响纳米材料生物效应的因素 ．．12 1．2．5纳米生物研究中的当时原则 ．．12 1．2．6变量控制 ．．13 1．3纳米材料的自噬效应 14 1．3．1纳米材料诱导自噬的研究现状 ．．14 1。3．2影响纳米材料的自噬效应的因素 一16 1．4本课题研究内容、方法与原则 1 9 1．4。1探寻纳米材料的性质与细胞自噬的关系 ．。19 1．4．2本课题的研究方法 一20 1．4-3实验设计与原则 一20 万方数据 1．5参考文献 1．5参考文献 22 第二章实验方法 30 2．1实验材料和仪器 30 2．1．1微纳米材料合成、修饰与表征相关试剂材料 ．．30 2．1．2细菌培养相关试剂材料 ．．31 2．1．3细胞系来源 ．．31 2．1。4细胞培养相关试剂材料 ．．31 2．1．5细胞实验相关试剂材料 ．．32 2．1．6细胞免疫荧光相关试剂材料 ．．33 2．1．7 Western blot相关试剂材料 ．33 2．1．8水源 ．34 2．1．9仪器设备 ．．34 2．2纳米材料的合成、修饰与表征 37 2．2．1高温分热解法合成纳米氧化铁 ．．37 2．2．2纳米氧化铁表面修饰柠檬酸钠(10@citrate) 37 2．2．3纳米氧化铁表面修饰多巴胺(10@DA) 38 2．2．4纳米氧化铁表面修饰二羟基苯乙酸(IO@DOPAC) 38 2．2．5纳米氧化铁表面修饰二巯基丁二酸(IO@DMSA) ．．38 2．2．6 10 nm氧化铁的合成与表面修饰(IO．10) ．38 2．2．7 100 nm氧化铁的合成(IO．100) ．．38 2．2．8纳米金的合成 ．．39 2．2．9纳米金表面修饰二巯基丁二酸(Au@DMSA) ．39 2．2．10纳米金表面修饰二巯基丙磺酸(Au@DMPS) 39 2。2．11纳米二氧化硅的合成 39 2。2。12纳米二氧化硅表面的羧基化 40 2．2．13二氧化硅表面季铵化 40 2．2．14邻二氮菲比色法检测铁浓度 40 2．2．15金纳米材料的浓度测定 40 2．2．16硅钼蓝比色法测定二氧化硅浓度 40 2．2．1 7动态光散射表征纳米材料水合粒径与‘电势 4 1 万方数据 2．2．18电子显微镜表征纳米材料 2．2．18电子显微镜表征纳米材料 41 2．3微米材料的制备与表征 41 2．3．1固体粉末 ．．4l 2．3．2固体沉淀 一42 2．3．3二氧化硅微球的制备 ．．42 2．3．4罗丹明掺杂的荧光硅球的制备 一43 2．3．5二氧化硅微球的羧基化修饰 ．．43 2．3．6二氧化硅微球表面修饰PEG ．43 2．3．7二氧化硅微球的氨基化修饰 ．．44 2．3．8硅球的消毒处理 ．．44 2．3．9二氧化硅微球的表征 ．．44 2．4细胞培养 44 2．5慢病毒法构建稳定表达外源GFP．LC3蛋白的细胞系 44 2．5．1含GFP．LC3基因的慢病毒载体构建 44 2．5．2载体质粒扩增与纯化 ．．45 2．5．3慢病毒的生产与浓缩 ．．46 2．5．4稳定转染外源GFP．LC3蛋白的HeLa细胞系构建 ．46 2．5．5稳定转染的细胞系鉴定 ．．49 2．6其他表达外源LC3蛋白的细胞系构建 ．．49 2．6．1脂质体转染构建SK-Ov-3．GFP．LC3细胞系 49 2．6．2诱导表达外源GFP．LC3蛋白的细胞系构建 50 2．6．3稳定表达RFP．GFP．LC3的细胞系构建 50 2．7纳米材料分散性的控制 50 2．7．1移液器吹打调节纳米材料分散性 ．．50 2．7．2通过稀释调节纳米材料分散性 ．．51 2．7．3通过BSA预吸附调节纳米材料的分散性 51 2．7．4不同表面修饰的纳米材料的自噬效应比较 ．．51 2．7．5通过预先在PBS溶液中分散调节纳米材料的最终分散性 52 2．7．6纳米金和纳米二氧化硅的分散性控制 ．．52 2．8常规细胞实验 52 2．8．1活细胞实验的基本原则 ．．52 万方数据 2．8。2 2