蚕豆病鉴定的实洞验设计.ppt

实验流程 取抗凝血2ml，生理盐水洗涤红细胞3次（1500r/min离心 10min） 除去上清液和乳白层（白细胞和血小板） 加等体积生理盐水→红细胞悬液 红细胞悬液0.05ml+溶血素0.5ml，混合，放置10min → 溶血液 并测定其Hb浓度 进行比色 （见下表） 红细胞G6PD活性测定 G-6-PD活性测定的操作表（Zinkham法 ) 试管 对照管 测定管 NADP液（ml） 0.1 0.1 Tris液（ml） 0.1 0.1 氯化镁液（ml） 0.1 0.1 蒸馏水（ml） 0.68 0.58 G6P液（ml） — 0.1 37℃预热 溶血液（μl） 20 20 红细胞G6PD活性测定 立即340nm处测吸光度，以对照管调零，37℃恒温，每分钟观察1次，记录吸光度的变化 实验流程 计算公式：G-6-PD活性（U/gHb） =△A/min×1000/6.22×1020/20× Hb(gL-1) △A/min:每min吸光度的平均变化值 1000/6.22:为微摩尔消光系数 1020/20:总容量与溶血液的量之比； 实验流程 红细胞G6PD活性测定 * * ★年级、专业、班级： 2010级临床三、四大班 ★实验课时间：2012年4月18日 ★实验室：第二实验室 ★组别：第四组 ★组员：梁婧、和珍、李艳、张玲艺、解汐卓、成春梅、 吴皎、杨紫燕、王骁、张庆昆 ★报告人：吴皎 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。 实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5μmol/L，结合胆红素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 1、根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初 步判断患儿是何种疾病？ 2、请设计实验进一步明确诊断。 3、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果。 4、 要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？ 5、 患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？ 初步判断患儿是何种疾病？ 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD） 缺乏症（蚕豆病） 性别：男性 年龄：3岁 主要症状：体温38℃、面色苍白、血尿1天、皮 肤及巩膜黄染、恶心、呕吐 诱因：1天前食用新鲜蚕豆 既往史：患者的姐姐也曾发生过类似情况 ·概念：G6PD缺乏症是一种遗传性溶血性疾病。发病率 具有地方、民族差异性。 发病机制： G6PD↓ →NADPH+H+↓ →GSH↓ → 红细胞的抗 氧化能力↓ →发生溶血 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症 正常红细胞 溶血性贫血 红细胞 左：健康新生儿 右：溶血性贫血患儿（黄疸） 左：健康新生儿 右：溶血性贫血患儿（黄疸） 正常红细胞 溶血性贫血 红细胞 左：健康新生儿 右：溶血性贫血患儿（黄疸） 正常红细胞 溶血性贫血 红细胞 左：健康新生儿 右：溶血性贫血患儿（黄疸） ·分类： 伯氨喹啉型药物性溶血性贫血 新生儿黄疸 蚕豆病 感染性溶血 先天性非球形细胞溶血性贫血（CNSHA） 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症 蚕豆病 是一种6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6-PD）缺乏所导致的疾病，表现为在遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺陷的情况下，食用