酶工程山来东师范大学.ppt

提取原则 a. 相似相溶。 b. 远离等电点的pH值，溶解度增加。 （二） 有机溶剂沉淀（降低介电常数） 利用酶等蛋白质在有机溶剂中的溶解度不同而使之分离的方法。 1. 沉淀机理 降低溶液的介电常数 部分地引起蛋白质脱水 2. 常用有机溶剂 丙酮?乙醇?甲醇，用量一般为酶液体积的2倍左右，终浓度为70%。 3.优缺点： 优点：1）分辨率比盐析法高 2） 沉淀不需脱盐 3）溶剂易蒸发，沉淀易离心 缺点：1）容易引起蛋白质变性失活 2)有机溶剂易燃、易爆，对安全要求较高。 （三） 等电点沉淀(isoelectric precipitation) 1.原理 蛋白质在等电点时溶解度最低 不同的蛋白质具有不同的等电点 2. 使用方法 单独使用较少（用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白），多与其它方法联合使用（如盐析法、有机溶剂法），因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度。 3. 优点： 1）大多数蛋白质的pI都在偏酸性范围内 2）无机酸（如磷酸、盐酸、硫酸）价格较低 3）无需除掉多余酸即可进行下一步纯化 4. 缺点： 酸化时，容易引起蛋白质失活 单级萃取 使用一个混合器和一个分离器 单级萃取流程93 （二） 双水相萃取技术 又称水溶液两相分配技术 （partion of two aqueous phase system） 用两种不相溶的亲水性高分子聚合物水溶液，如聚乙二醇（PEG）和葡聚糖（Dextran）进行萃取。由于形成的两相均有很高的含水量（达70%?90%），故称“双水相”系统。 几种典型的双水相系统 聚丙二醇 聚乙二醇、聚乙烯醇 葡聚糖（Dex） 羟丙基葡聚糖 聚乙二醇（ PEG） 葡聚糖（Dex） 硫酸葡聚糖钠盐 聚丙烯乙二醇 羧基甲基葡聚糖钠盐 甲基纤维素 聚乙二醇（ PEG） 磷酸钾、硫酸铵 硫酸钠、硫酸镁 3. 应用 胞内酶的提取和精制: 除去细胞碎片，并使酶得到纯化。 几种典型的双水相萃取酶蛋白实例 酶 菌 种 相系统 延胡索酸酶 Brevibacterium sp. PEG/ 盐 天冬氨酸酶 E. coli PEG/ 盐 ?-半乳糖苷酶 E. coli PEG/ 盐 亮氨酸脱氢酶 Bacillus sp. PEG/Dex 乙醇脱氢酶 Baker’s yeast PEG/ 盐 青霉素酰化酶 E. coli PEG/ 盐 亲和萃取酶实例 （三） 超临界流体萃取 兼有蒸馏和溶液萃取的特征，与常规溶剂萃取的区别：将超临界流体作为萃取剂。 超临界流体(supercritical fluid，SCF）：超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。 基本过程： 1）在SCF中，溶解度大的物质溶于其中，与不溶解或溶解度小的物质分开。 2）降低压力，使SCF变为气态（密度降低），溶解物质能力下降，萃取物与溶剂分离。 超临界CO2萃取技术在生物、食品 等工业中的应用 CO2萃取部分产品 原料名称 产物名称 原料名称 产物名称 小麦胚芽 胚芽油 豆子 豆油精炼油 啤酒花 啤酒花精油 茉莉花 净油 辣椒 辣椒红色素 菊花根 除虫菊酯 当归 精油