聚乳酸生物降解酶及其催化特性研究-微生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 山东大学博士学位论文缩略词表 山东大学博士学位论文 缩略词表(Abbreviation) 10 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：二纽导师签名：卫簋鲰日 期：量煎：!：乡 山东大学博士学位论义摘 山东大学博士学位论义 摘 要 石油基塑料作为材料产业的一大支柱，已经成为社会生活不可或缺的一部 分，但随着白色污染的严藿及石油资源的日益匮乏，其地位明显动摇，绿色高分 子材料逐步受到青睐。目前开发的绿色高分子材料主要是聚酯类，其优势体现在 具有生物可降解性和可再生性；而且，天然的或经过改性的聚酯具有和传统塑料 相当甚至更优的机械性能和物理化学性能，能够满足人们社会生活的需求，其中 聚乳酸(PLA)以其优良的物理化学性能和潜在的成本优势尤受人们的关注。目 前相对于其它高分子材料，PLA已经以其性能和成本优势率先实现了大规模的产 业化生产，成功地应用予医疗、统织和包装等产业，被认为是簸具潜力的替代现 有塑料的新型“生态材料”之一。 虽然PLA在性能和生产应用上与其它聚酯相比具有明显的优势，值其生物降 解的研究却相对滞后。PLA在自然界中降解缓慢，发现的降解微生物和高效降解 酶有一定的特殊性，这限制了针对PLA废弃物处理回收系统的开发，丽没有成功 的回收系统将无法实现PLA生产的物料循环。目前PLA的降解机理尚未阐明，这 在缀大程度上限翩了可控降解材料的开发，也限制了PLA材辩的推广和应用，只 有强化PLA的快速降解性和完全降解性机理的研究，才能够真讴实现其环境友好 化。因此，本文从PLA降解菌株高发，研究了P乙A降觯酶的性质及催纯特性，从 酶催化机理及进化分析的角度对PLA的降解机制进行了探讨。本文主要的工作内 容及缨梁如下： 1．遵过对土壤样品和菌种库菌种的筛选，获得了一株高效降解PLA的菌 耕卜4mycolatopsis orientalis。 自然界中降解PLA的菌株十分有限，主要集中在稀有放线萤中。本文通过 土壤和菌种库的筛选获得了对PLA具有降解作用的菌株，并以其中降解能力相 对高效的Amycolatopsis orientalis为研究对象，进行了降解性能的评价和表征， 证实该菌株可以以PLA为唯一碳源进行生长，吸收降解产物乳酸。诱导实验结 果显示该菌株分泌产生诱导型的PLA降解酶，除了PLA以外，蛋白类物质(明 胶、蚕丝、蛋白胨等)也可以高效的诱导PLA降解酶的产生，推测降解酶与蛋 山东大学博士学位论文白酶类存在着一定的相关性。通过比较，确定选择明胶为最健诱导物进行下一步 山东大学博士学位论文 白酶类存在着一定的相关性。通过比较，确定选择明胶为最健诱导物进行下一步 的诱导产酶。 2．从Amycolatopsis orientalis发酵液中同时分离到了三种对PLA具有高效 降解器用的降解酶。 目前国际上报道的从聚乳酸降解菌株中分离得到的降解酶只有3个，并且均 为单酶组分。本文首次利用离予交换、蔬水层析、分子簿层桥等分离方法从 Amycolatopsis orientalis发酵液中分离到了三种对PLA具有高效降解作用的降解 酶，并对其催化特性进行了系统的研究。研究发现三耱降解酶的分子量分别为 24．0、19．5和18．0 kDa，且均为碱性蛋白。活性比较及动力学参数分析都显示出 这些降解酶对PLA的降解活性均比PLA的代表性降裤酶一蛋白酶K要高。除 了对PLA具有降解作用以外，这些PLA降解酶对蛋白及小肽类物质也都具有降 解活性，显受丝氨酸蛋囱酶抑制荆PMSF的强烈抑制，铁催纯特性上分析该酶可 能属于丝氨酸蛋白酶。MALDI．TOF肽指纹图谱分析结果显示，三个降解酶的胰 酶酶解峰各不搁弱，可麓不是来源于露一前体，面是独立的降艇酶组分；质谱结 果的数据库比对没有找到匹配程度较高的鬣白，暗示这些降解酶可能是没有经过 系统磺究的薪的酶类。 3．利用降解酶生化信息克隆到两个PLA降解酶基因，并初步实现了其异源