代谢改造热带假丝酵母发酵木糖母液生产木糖醇.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（５）：６６７５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 代谢改造热带假丝酵母发酵木糖母液生产木糖醇 １，２ １，２ １，２ ３ １，２ １，２ 陈　振 　陈献忠 　张利华 　王均华 　沈　微 　樊　游 （１工业生物技术教育部重点实验室　无锡　２１４１２２） （２江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心　无锡　２１４１２２） （３粮食发酵工艺与技术国家工程实验室　无锡　２１４１２２） 摘要　木糖醇是一种在食品、医药、轻工等领域具有广泛用途的多元醇，目前主要通过酸水解木 聚糖获得木糖并进一步化学催化加氢方法制备。提取木糖过程中会产生大量的木糖母液副产 物，其中含有一定浓度的葡萄糖、木糖、阿拉伯糖等碳源，以及少量的糠醛、四氢呋喃等物质。研 究微生物转化木糖母液生产高附加值化学品不仅能够提高木糖母液的利用价值，而且能够减少 环境污染。热带假丝酵母不仅能够利用葡萄糖，也具有高效的木糖代谢途径。首先利用代谢工 程技术删除了热带假丝酵母菌株的木糖醇脱氢酶基因，获得能够转化木糖积累木糖醇的突变株。 在此基础上，评价了突变株在木糖母液培养基中的发酵性能。通过单因素优化实验确定了突变 株发酵生产木糖醇较优的发酵工艺：培养基组成为木糖母液３００ｇ／Ｌ，玉米浆５ｇ／Ｌ；最佳发酵条件 为：发酵温度３５℃，初始ｐＨ为５．０，接种量１５％，２００ｒ／ｍｉｎ摇床培养 １４０ｈ。利用优化后的发酵工 艺，木糖醇产量达到８３．０１ｇ／Ｌ。初步建立了转化木糖母液生产木糖醇的工艺，为进一步利用木糖 母液奠定了基础。 关键词　热带假丝酵母　木糖醇　木糖母液　基因删除　发酵 中图分类号　Ｑ８１５ 　　木糖醇是一种在水果及蔬菜中广泛存在的五碳糖 且可以保护环境。 ［１］ 　　目前发现可以利用木糖的微生物有一百多种，大 醇 ，但含量极低，直接从其中提取不经济。木糖醇在 食品、医药、轻工等领域具有广泛用途，如作为糖尿病 多数研究限于念珠菌的某些种类。其中热带假丝酵母 ［２］ ［５］ 患者的辅助治疗剂 、防龋齿、改善肝功能、调节肠道 的木糖转化能力较强 ，并且对木糖母液中的糠醛、乙 ［３］ 酸和酚类等抑制物具有较高的耐受能力。热带假丝酵 等 。目前工业化的木糖醇生产方法主要是化学生产 ［４］ 母菌株中的木糖代谢途径如图 ［５］ 法 ，即将富含多缩戊糖的玉米芯、棉籽壳、甘蔗渣等 １所示 ：木糖在木糖 材料经酸水解后分离纯化获得木糖，再经氢化得到木 还原酶（ｘｙｌｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＸＲ）的作用下还原为木糖醇， 糖醇。木糖分离纯化过程中会产生大量的浓缩废液 再经过木糖醇脱氢酶（ｘｙｌｉｔｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＸＤＨ）氧化 （木糖母液），其中仍含有一定量的木糖，但从中进一步 生成 Ｄ木 酮 糖。Ｄ木 酮 糖 经 过 木 酮 糖 激 酶 分离纯化木糖成本较高。木糖母液的主要成分有葡萄 （ｘｙｌｕｌｏｋｉｎａｓｅ，ＸＫ）磷酸化后生成 Ｄ木酮糖５磷酸，再 ［５］ 通过磷酸戊糖途径和糖酵解途径降解为丙酮酸。最 糖、木糖、阿拉伯糖等糖类 ，以及糠醛、乙酸等抑制菌体 生长的物质。目前，国内木糖醇的产量在 １３万吨／年， 后，丙酮酸进入ＴＣＡ循环完全氧