酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体方法建立.pptVIP

摘要 原理：以伤寒O抗原免疫动物，制备出抗伤寒O抗体，将后者纯化，与酶连接制备成酶标抗体，以伤寒O抗原包被酶标板，以制备的伤寒酶标抗体为竞争抗体，可以构成竞争法检测伤寒抗体的酶联免疫实验。 摘要 制备伤寒O抗体 纯化抗体 酶与抗体的连接 酶与抗体的连接 3.加入2.5%乙二醇溶液0.5ml（稳定剂）终止反应，室温30min 。 4.加入待标Ab1.5~2.0ml,用pH9.5碳酸盐缓冲液调整反应液的pH至 9.0左右，4℃过夜。 5.加入0.1ml硼氢化钠，4℃2小时。 6.pH7.4 PBS液透析过夜，收集、标记成酶标记抗体和冻存 酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体 （一）.酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体预实验 1.包被Ag：抗原（伤寒）用包被液稀释，每孔加入100μl，置37℃作用4h或4℃作用24h。 2.洗涤：弃去孔中液体，洗涤液洗涤3次，每次1min，于吸水纸上充分拍干。 3.加入样品：每孔加入酶标Ab及Ab各100μl，放入37℃恒温箱中孵育30min。（如图1） 4.洗涤：同上 5.加入底物液：每孔加入底物液A1滴、B1滴，避光放置约5-15min，密切观察。 6.终止反应 酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体 酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体 稀释方法： 1.酶标抗体 1:25——1200ul(牛奶）+50ul（酶标）=1250ul 1:50——60