羊草脂氧合酶同源蛋白基因LcLHP的克隆与表达分析-华北农学报.PDFVIP

华北农学报 ·２０１５，３０（４）：３５４２ 羊草脂氧合酶同源蛋白基因ＬｃＬＨＰ的 克隆与表达分析 张　，孙天旭，郭勃予，汤明威，李玉花，解莉楠 （东北林业大学 生命科学学院，黑龙江 哈尔滨　１５００４０） 　　摘要：为验证羊草脂氧合酶同源蛋白基因ＬｃＬＨＰ与盐胁迫的关系，利用 ＲＡＣＥ（ＲａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓ） 克隆技术从羊草中克隆得到抗盐碱相关基因脂氧合酶同源蛋白基因（ＬＨＰ，Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅｈｏｍｏｌｏｇｙｐｒｏｔｅｉｎ）的ｃＤＮＡ全 长序列，其 ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＪ４７２８９４。ＬｃＬＨＰ基因开放阅读框为５３７ｂｐ，编码 １７８个氨基酸。ＬｃＬＨＰ中含有ＰＬＡＴ／ ＬＨ２结构域，该结构域蛋白家族的许多成员受胁迫诱导。同源性分析显示，ＬｃＬＨＰ与互花米草 ＰＬＡＴ／ＬＨ２家族蛋白 脂氧合酶、ＰＬＡＴ植物胁迫结构域包含蛋白等同源性较高，蛋白功能预测显示其 Ｎ端可能存在信号肽并可能具有酶功 能。ＲＴＰＣＲ分析显示，在一定盐碱胁迫条件下，随着处理试剂 ＮａＣＯ 溶液处理时间的延长，ＬＨＰ基因在羊草中的表 ２ ３ 达量呈单峰趋势，在 １２ｈ时达到峰值；构建重组表达载体 ｐＧＥＸＬｃＬＨＰ并进行 ＩＰＴＧ原核诱导表达培养，获得了 ＧＳＴ ＬｃＬＨＰ融合蛋白并用 ＧＳＴ抗体进行 ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ试验得到验证。 关键词：羊草；盐碱胁迫；ＬｃＬＨＰ；ＲＡＣＥ克隆；表达分析 中图分类号：Ｑ７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－７０９１（２０１５）０４－００３５－０８ ｄｏｉ：１０．７６６８／ｈｂｎｘｂ．２０１５．０４．００７ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＬｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅＨｏｍｏｌｏｇｙ ＰｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍＬｅｙｍｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ＺＨＡＮＧＹａｎｇ，ＳＵＮＴｉａｎｘｕ，ＧＵＯＢｏｙｕ，ＴＡＮＧＭｉｎｇｗｅｉ，ＬＩＹｕｈｕａ，ＸＩＥＬｉｎａｎ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ　１５００４０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｋｎｏｗｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｂｅｔｗｅｅｎＬｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅａｎｄｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ，ａｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｎａｍｅｄ ＬｃＬＨＰｒｅｌａｔｅｄｔｏｓａｌｉｎｅａｌｋａｌｉｔｏｌｅｒａｎｃｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍＬｅｙｍｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｂｙＲＴＰＣＲａｎｄＲＡＣＥ（Ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａ ｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓ）．ＬｃＬＨＰｇｅｎｅ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＫＪ４７２８９４）ｗｉｔｈ５３７ｂｐｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｅｎｃｏｄｅｄａｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈａ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄｌｅｎｇｔｈｏｆ１７８ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＬｃＬＨＰｈａｓＰＬＡＴ／ＬＨ２ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｄｏｍａｉｎ，ｗｈｉｃｈｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｓｔｒｅｓｓ．Ｈｏｍｏｌｏ ｇｙａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｅｄｕｃｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＬｃＬＨＰｓｈａｒｅｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＰＬＡＴ／ＬＨ２ｐｒｏｔｅｉｎ ｆａｍｉｌｙｏｆＳｐａｒｔｉｎａａｌｔｅｒｎｉｆｌｏｒａａｎｄＰＬＡＴｓｔｒｅｓｓｐｒｏｔｅｉｎ．ＰｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄＮｔｅｒｍｉｎａｌｏｆＬｃＬＨＰｍａｙ ｈａｖｅｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ，ａｃｔａｓｅｎｚｙｍｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＬｃＬＨＰｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＲＴＰＣＲｕｎｄｅｒｓａｌｉｎｉｔｙａｌｋａｌｉｎｉｔｙ ｓｔｒｅｓｓｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｗｉｔｈｔｈｅｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｔｈｅｓａｌｉｎｉｔｙａｌｋａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓｅｄｔｉｍｅ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＬｃＬＨＰｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ０ ｔｏ１２ｈｉｎｔｈｅｌｅａｆ，ａｎｄｔｈｅｎｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｐ