固定化金属亲和磁性纳米粒子在蛋白质分离纯化中的应用.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT1 固定化金属亲和磁性纳米粒子在蛋白质分离纯化中的应用 摘要 ：固定化金属亲和色谱（IMAC）在蛋白质分离纯化方面已得到广泛应用。将IMAC的固体基质部分用磁性纳米粒子（MNPs）取代，可 得 到 固 定 化 金 属 亲 和 磁 性 纳 米 粒 子（IMAN）.IMAN中MNPs的引入使其比IMAC具有更广泛的应用价值，近年来已广泛应用于蛋白质的分离纯化。文章重点总结了IMAN的组成、分离纯化蛋白质的原理、在蛋白质分离纯化中的应用，以及影响分离纯化蛋白质的因素，并简要评述和展望了IMAN的发展方向和应用前景。 关键词：固定化金属离子亲和层析； 磁性纳米粒子； 固定化金属亲和磁性纳米粒子； 蛋白质；分离纯化 随着蛋白质组学的快速发展和基因组时代的到来，蛋白质纯化技术也面临着新的挑战。目前，沉淀[1]、层析[2]、离心[3]和电泳[4]等是蛋白质纯化的主要方法，其中色谱法应用较为广泛。固定化金属亲和色谱(IMAC) 是一种利用过渡金属离子(如Cu2+、Zn2+、Co2+、Ni2+ 等) 与氨基酸残基(如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等上的咪唑基、吲哚基、硫醇基等)的配位作用[5,6]，选择性地分离对这些过渡金属离子具有亲和能力的蛋白质的一种分离纯化技术。IMAC 分离纯化蛋白质虽已得到广泛的应用，但其纯化蛋白时通常需要经历蛋白样品前处理(如离心、过滤和膜分离)、装柱、洗脱、收集、浓缩、干燥等[7]一系列复杂的操作过程，费时费力，难于大规模地对多个蛋白质样品进行分离纯化。因此，对IMAC 的不断改进成为了近年来该领域的研究热点。 磁性纳米粒子(MNPs) 的应用给蛋白质的分离纯化带来了巨大的应用前景[8～10]。将螯合剂通过化学键连接在MNPs上，再螯合上金属离子，即可制备出固定化金属亲和磁性纳米粒子(IMAN)。IMAN具有磁响应性，吸附目标蛋白质后在外磁场作用下即可与原体系分离，再经洗脱即可将蛋白质与IMAN分离而得到目标蛋白质[11]。用IMAN分离纯化蛋白质较IMAC 省去了过滤、离心等复杂的样品前处理和装柱等步骤，操作简单、快速，非常适用于多种蛋白质样品的分离纯化，是一种具有较好发展前景的分离纯化方法。但在制备IMAN 时，往往需要对MNPs 进行修饰或使用适当的偶联剂来连接螯合剂，这样就会降低IMAN 的磁性，使蛋白质的提取受到一定的影响。因此，开发高磁性和高稳定性的磁性金属螯合柱是今后应重点解决的问题之一。 1 IMAN的组成及分离纯化蛋白质的原理 1.1 IMAN的组成 IMAN是IMAC的一个重要改进，它既具有IMAC亲和蛋白质的能力又具有磁响应性。IMAN主要由磁性纳米粒子、螯合剂和金属离子组成(图1 所示)，其组成的不同或蛋白质标签的差异都会影响目标蛋白质的纯化效果。 1.2 磁性基质 MNPs比一般微米尺寸的脂质或商业磁珠具有更高的表面积与体积比，生物相容性好，具有较高的结合率和储热能力；其大小为纳米尺寸，因而可以快速地移动并易于进入细胞；它的磁可控聚集行为使它能够被固定到固体支持物上并被进一步使用，因而具有很大的应用价值。在IMAN 中，这种具有金属螯合能力的亚微米尺寸的磁铁矿等磁性纳米材料一般被称为磁性基质。当磁性纳米材料作为基质时需要对MNPs 表面进行特定的修饰，以增加它的可溶性、分散性并使其易于与其它物质连接，从而提高IMAN 分离纯化蛋白质的效率。目前，常用于MNPs 表面修饰的材料主要为有机小分子[12]、无机材料[13～15]和高分子材料[16]等，表面修饰使MNPs 表面具有特定的功能基团，如 MNPs-OH、MNPs-NH2、MNPs-SH、MNPs-COOH 等。 1.3 螯合剂 在分离纯化蛋白质中，常用于螯合金属离子的螯合剂有：三齿配体亚氨基二乙酸(iminodiacetic acid，IDA)、四齿配体次氮基三乙(nitrilotriacetic acid，NTA)、五齿配体N, N, N- 三(羧甲基) 乙二胺〔tris (carboxymethyl) ethylenediamine，TED〕、羧甲基天冬氨酸(carboxymethylated aspartic acid，CM-ASP) 等。目前，常用的螯合剂是三齿配体的IDA和四齿配体的NTA。 1.4 金属离子 在IMAN 蛋白质纯化系统中，不同金属离子可与不同蛋白质相互作用[17～19]，在某种意义上，金属离子可直接决定蛋白质分离纯化的效果。过渡金属离子在蛋白质分离纯化中使用较多，而使用其它金属离子(如Fe3+、Al3+、Ga3+、In3+、Tl3+、Ag+、Cd2+、Mn2+、La3+、Nd3+、Eu3+、Hg2+、K+、Yb3+、Mg2+等) 也有报道，最常用的金属离子主要有：Cu