解淀粉芽孢杆菌sini基因突变株的构建及对生物膜形成与抑菌活性的影响-森林保护学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 英文缩略词及中文对照表英文缩写 英文缩略词及中文对照表 英文缩写 英文全称 中文名称 heXadecyl trimemyl aII吼。Ili啪 CTAB 十六烷基三甲基溴化铵 bromide EDl’A ethylene diamine tetraacetic acid 已二胺四乙酸 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 瞄s tris droxymethy aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 X—gal 5-Bromo-4一chloro．3一indolyl 13 D 5．溴4．氯一3-吲哚-p—D一半乳糖苷 galactoside IPTG Isopropylthio．p．D—galactoside 异丙基硫代 13 D半乳糖苷 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 RNage IUbounclease 核糖核酸酶 EB ethidium bromide 溴化乙锭 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 Kan Kanamycin 卡那霉素 OD Optical density 光密度 dNTP Deoxyribonucleoside triphoshate 脱氧核苷三磷酸 TE 晡s／EDTA buffer Tris／EDTA缓冲液 bp Base pairs 碱基对 TAE Tris／aCetic acid／EDTA buffer I ris一乙酸缓冲液 nUn minute 分钟 SeC second 秒 mL microliter 毫升 gL milliliter 微升 。C centigrade 摄氏度 万方数据 目录中文摘要 目录 中文摘要 ．I Abstract III 1前言 ．1 1．1生防芽孢杆菌的研究现状 ．1 1．2生物膜 。2 1．2．1细菌生物膜的概念 一2 1．2．2细菌生物膜的形成过程 一2 1．2．3细菌生物膜形成的调控基因 一3 1．2．4细菌生物膜研究现状 一4 1．3抗菌活性 ．5 1．3．1抗菌活性物质简介 。5 1．3．2芽孢杆菌生物膜形成与抗菌活性的关系 一6 1．4 sinI研究进展 7 1．5基因打靶技术 ．9 1．5．1同源重组技术 。9 1．5．2结合反向筛选标记的两步单交换同源重组 一9 2材料与方法 。10 2．1材料 一10 2．1．1菌株与质粒 1 0 2．1．2溶液与培养基配制 10 2．1．2．1溶液配制 ．10 2．1．2．2培养基配制 ．11 2．1．3仪器与试剂 12 2．1．3．1主要仪器 ．12 2．1．3．2生化及分子生物学试剂 ．12 2．2方法 ．．12 2．2．1 sinI基因缺失突变株的初步构建 ．12 2．2．1．1 sinI基因缺失突变株构建方法设计 12 2．2．1．2序列分析 ．13 2．2．1．3突变引物设计 ．13 2．2．1．4 sinI同源前、后臂的PCR扩增 ．14 2．2．1．5同源前臂sinlF与同源后臂sinlR的连接 15 2．2．1．6 sinlF-sinlR与pMDl8一T连接 16 2．2．1．7 sinlF-sinlR-pMDl8一T的转化及验证 ．16 万方数据 2． 2．2．1．8 sinlF-sinlR的重组质粒和自杀质粒pKl8mobsacB的提取 ．17 2．2．1．9 sinlF-sinlR-pMDl8．T与pKl8mobsacB质粒的双酶切 18 2．2．1．10 sinlF-sinlR-pMDl8．T重组质粒与pKl8mobsacB质粒的双酶切产物的连接 ．18 2．2．1．11 sinlF．sinlR-pKl8mobsacB转化E coli T1及验证 ．18 2．2．1．12 sinlF．sinlR-pKl8mobsaeB重组质粒的提取及验证 18 2．2．1．1 3区amyloliquefaciens PEBA20感受态的制备 。1 9 2．2．1．14 sinlF-sinlR-pKl8mobsacB质粒电转化 19 2．2．1．15卡那筛选获得第一次重组的丑amyloliquefaciens PEBA20菌体 19 2．2．1．16蔗糖筛选获得第二次重组的丑amyloliquefaciens PEBA20菌体 20 2．2．1．17二次重组PEBA20菌体验证 20 2．2．2．丑amylo蛔uefaciens PEBA20zAsinI突变株