马天然免疫限制因子tetherin对马传染性贫血病毒的限制作用及病毒拮抗机制研究-兽医学;预防兽医学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：no NO．100040 Dissertation for the Doctoral Degree The Mechanism of Equine Tetherin·— Mediated Restriction of Equine Infectious Anemia Viruslru an its Antal兰onist Candidate：Yin Xin Supervisor：Prof．Weiwe Ping Degree Category：Doctor of Agriculture College：Veterinary Medicine First level discipline：Veterinary Medicine Second level discipline：Preventive Veterinary Medicine Harbin China December 2014 万方数据 目 目 录 IIii11}}1111 IIIII HIIIIIII]I IIIIll)f 目 录 Y2771 831 中文摘要 ．I 英文摘要 ．．III 1前言 1 1．1 EIAV的发现 1 1．2 EIAV的传播与控制 1 1．3 EIAV的病毒粒子结构与构成 ．2 1．4 EIAV的编码蛋白与功能 。3 1．4．1结构蛋白 ．．3 1．4．2辅助蛋白 ．4 1．5 EIAV的细胞嗜性 5 1．6 EIAV的生命周期 6 1．6．1 EIAV的入侵过程 ．6 1．6．2 ELAV的脱衣壳过程 。7 1．6．3 EIAV的反转录过程 ．7 1．6．4 EIA=V的整合过程 ．8 1．6．5 EIAV的转录与翻译过程 ．9 1．6．6 EIAV的出芽与组装过程 ．9 1．7天然免疫限制因子研究进展 10 1．7．1 APOBEC3 ．10 1．7．2 TRIM5a ．12 1．7．3 SAMHDl ．．14 1．7．4 MOVl 0 ．．16 1．8 Tetherin的抗病毒及病毒拮抗机制研究 17 1．8．1 Tetherin的分子特征 一18 1．8．2 Tetherin的抗病毒作用机制 19 1．8．3 Tetherin的拮抗蛋白 20 1．9本研究的目的与意义 24 2材料和方法 ．．25 2．1材料 25 2．1．1细胞与病毒 25 2．1．2质粒与菌株 25 2．1．3试剂与耗材 26 2．1．4主要仪器 27 2．1．5试剂配制 27 2．2方法 27 万方数据 东北农业大学农学博士学位论文2 东北农业大学农学博士学位论文 2．2．1马巨噬细胞的分离培养 一27 2。2．2 RNA的提取与反转录 ，28 2．2．3普通PCR与定点突变PCR反应 一28 2．2．4 Real．time RT-PCR 29 2．2．5 siRNA干扰实验 ，29 2．2．6病毒一步生长曲线的绘制 ．29 2．2．7细胞转染 30 2．2．8 Western Blotting 30 2．2．9激光共聚焦检测 ．30 2．2．10免疫共沉淀 ．31 2．2．11数据分析 一31 3结果 32 3．1马tetherin基因的克隆及结构分析 ．．32 3．2马干扰素对马tetherin的诱导调控研究 ．．35 3．2．1马tetherin启动子序列的分析 ．．35 3．2．2马干扰素对马tetherin的诱导表达 36 3．3马tetherin的抗病毒活性研究 ．37 3．3．1马巨噬细胞内源性表达tetherin的抗病毒活性研究 37 3．3．2马tetherin的抗逆转录病毒活性分析 38 3．3．3马tetherin与EIAV病毒粒子的相互作用 40 3．3．4马tetherin抗病毒关键功能域的分析 41 3．4 EIAV对马tetherin抗病毒活性的拮抗机制研究 ．43 3．4．1野生型EIAV对不同种属tetlaerin抗病毒活性的敏感性 ．43 3．4．2 HIV-1 Vpu对马tetherin抗病毒活性的拮抗作用 ．．44 3．4．3 EIAV Rev与S2蛋白对马tetherin抗病毒活性的拮抗作用 ．．45 3．4．4 EIAV Env蛋白对马tetherin抗病毒活性的拮抗作用 46 4讨论 52 4．1马tetherin蛋白的分子结构及功能 ．52 4．2马tetherin广谱抗病毒活性的探讨 ．53 4．3 EIAV拮抗马tetherin抗病毒活性的分析 ．54 5结论 57 致{射 ．58 参考文献 ．．59 攻读博