静电纺关丝制备pvdf-g-pnipaam温敏纳米纤维及其在细胞培养与收获上的应用.docx

研究生优秀毕业论文 大连理工大学专业学位硕士学位论文摘 大连理工大学专业学位硕士学位论文 摘 要 通过胰酶消化作用对贴壁型细胞进行收获一直以来都是主要的细胞收获方式，但是 胰蛋白酶会破坏细胞外基质蛋白，从而导致细胞的结构和功能完整性遭到破坏。而通过 在温敏材料上进行细胞培养，然后利用降低温度使细胞自动脱附下来，能使细胞外基质 得以完整保存，具有优越性。聚N．异丙基丙烯酰胺(Poly(N．iSopropyl acrylamide)， PNIPAAm)作为一种应用广泛的温敏高分子材料，具备接近人体体温的最低临界溶解 温度(bwer critical solution temperature，LCST)。细胞的正常培养温度高于LCST， PNIPAAm表现出疏水性，适合细胞的粘附和生长，当降温到LCST以下后，PNIPAAm 又呈现亲水性，不再适合细胞的粘附，细胞能自动脱落下来。聚偏氟乙烯(Polyvinylidene fluoride，PVDF)是一种良好的基底材料，将PNIPAAm接枝到其分子链上，可以对 PNIPAAm的机械性、可纺性等起到一定的改善作用。纳米纤维结构可模拟细胞外基质， 利于细胞的粘附生长。利用静电纺丝技术将温敏聚合物制成纳米纤维结构，细胞在其表 面培养，可以达到良好的粘附生长效果，再利用降温脱附法，就能收获大量所需细胞。 本文利用碱处理法对PVDF粉体材料进行改性，得到了含有碳碳双键(C=C)或三 键(c三C)的新型聚合物。再以偶氮二异丁腈(2．azobisisobutyronilrile，AIBN)为引 发剂，通过改变NIPAAm单体与碱处理PVDF质量比的自由基聚合反应，制备了一系 列不同接枝率的PVDF—g-PNIPAAm的新型温敏聚合物。再通过傅里叶变换红外光谱和 核磁共振氢谱对其进行表征，确定PNIPAAm接枝成功，同时计算各接枝率。最后利用 静电纺丝技术，在摸索得到的电纺PVDF的较佳参数条件(接收距离15cm，纺丝电压 15kv，溶剂N，N．二甲基甲酰胺(DMF)与丙酮体积比8：2，纺丝液浓度12wt％)下，对 这一系列不同接枝率的PVDF—g-PNIPAAm温敏聚合物进行电纺，得到不同的 PVDF．g-PIPAAm纳米纤维膜M21、M43、M1l及M45。通过扫描电子显微镜观察各纤 维膜形貌，发现PNIPAAm的接枝对PVDF的可纺性产生了影响，接枝率越高， PVDF—g-PNIPAAm聚合物的可纺性越差。PVDF及PVDF—g-PNIPAAm的傅里叶变换红 外光谱表明静电纺丝不会改变温敏聚合物的结构。不同温度下不同温敏膜表面的静态水 接触角测试结果表明，不同接枝率的PVDF．g-PNIPAAm纤维膜都具备温敏性，且随着 PNIPAAm接枝率的增大，温度变化其表面产生的亲疏水性转变就越明显。 将PCI2细胞接种到MPvDF、M21、M43及M11表面进行细胞实验，考察了不同纤 维膜表面上细胞的粘附、增殖及生长情况，同时对比了不同温敏膜表面降温脱附法细胞 收获情况，并将M1 l上收获的细胞与胰酶消化法收获的细胞进行了对比。培养观察三 天，发现细胞能在各个纤维膜表面良好的粘附生长。细胞死活荧光染色图片显示各个纤 万方数据 静电纺丝制各PVDF．g．PNIPAAm温敏纳米纤维及其在细胞培养与收牡的应旦维膜上细胞均有较高活性，表明实验所制备的各温敏纤维膜均具有良好的生物相容性。 静电纺丝制各PVDF．g．PNIPAAm温敏纳米纤维及其在细胞培养与收牡的应旦 维膜上细胞均有较高活性，表明实验所制备的各温敏纤维膜均具有良好的生物相容性。 MTT法检测结果表明纳米纤维结构有利于细胞的增殖生长，其中M21上细胞生长最好， M1 1上相对较差，说明并不是接枝率越高越适合细胞的粘附生长，应该有一个合适的范 围。最后利用降温脱附法对三种温敏纤维膜上培养了三天的细胞进行收获，细胞的脱附 速率由高到低为：M11、M43、M21，说明高接枝率有利于细胞的脱附。与胰酶消化法 对比，结果也表明降温脱附法具有显著优势。 关键词：聚N一异丙基丙烯酰胺：聚偏氟乙烯；温敏纳米纤维；静电纺丝；降温脱附 法 万方数据 大连理工大学专业学位硕士学位论文Preparation 大连理工大学专业学位硕士学位论文 Preparation of PVDF--g-PNIPAAm Thermo--sensitive Fiber Membranes by Electrostatic Spinning and Application in Cultivation and Harvest of cells Ab stract Trypsin digestion has long been the main way to harvest ancho