基因平表达调控.pptVIP

共青团南京大学委员会 组织部 原核基因表达调控的基本类型： 1、转录水平的调控 起始阶段----主要 延伸阶段----通常不受调控 终止阶段----可能受到调控 2、翻译水平的调控 主要发生在起始和终止阶段 二、操纵子(operon) 1961年 Jacob and Monod ---乳糖操纵子模型 细菌转录调控的最初概念 （一） 概念： 在原核生物中，若干结构基因可串联在一起，其表达受到同一调控系统的调控，这种基因的组织形式称为操纵子。 （三）操纵子(operon)的基本组成 结构基因、调节基因、操纵元件（操纵基因）、 启动子、终止子 1、结构基因 （1）lacZ：编码b －半乳糖苷酶 （使乳糖水解） （2）lacY：编码b －半乳糖苷透过酶 （使b －半乳糖苷透过细胞壁、质膜进入细胞内） （3）lacA：编码b －半乳糖苷乙酰转移酶 （将乙酰基转移到b －半乳糖苷上） 2、启动子： Plac：控制 lacZ, lacY, lacA；多顺反子的mRNA 3、终止子 4、调节基因 lacI：编码阻遏蛋白（repressive protein）亚基 四聚体存在时具有活性，与 Olac具有 很强的亲和力 5、控制元件 操纵基因Olac （1）28bp的回文结构，可形成十字形结构 （2）这种结构正好与由四个相同亚基组成的阻遏 蛋白相匹配。 （二）乳糖操纵子的负调控 1、阻遏蛋白与操纵基因结合 2、阻碍了RNA聚合酶与启动子Plac的结合 3、转录不能进行 4、lacZ， lacY 、lacA低表达 （三）乳糖操纵子与负控诱导系统 1、阻遏蛋白与异构乳糖结合 2、阻遏蛋白构象变化，不能与操纵子序列结合 3、RNA聚合酶与lac启动子结合 4、lacZ， lacY ， lacA的转录可顺利进行 （一）组成 1、结构基因 （1）基因E、D、C、B、A （2）编码色氨酸合成所需要酶类 （3）头尾相接串连排列组成结构基因群 （4）组成一个转录单元 （5）多顺反子mRNA 2、调节基因trpR （1）位置:远离P-ｏ-结构基因群 （2）编码调控蛋白R （3）R没有与操纵元件ｏ结合的活性 （4）当环境能提供足够浓度的色氨酸时，R与色氨酸结合后构象变化而活化 （5）R与ｏ特异性结合，抑制结构基因的转录 3、操纵元件ｏ （1）18bp的回文结构 （2）与色氨酸启动子Ptrp序列在–21 and +3 碱基之间重叠 （3）与Trp-R特异性结合，阻遏结构基因的转录 现象： 培养基中 Trp 浓度较低时--- 基因E、D、C、B、A高表达 Trp 浓度较高时--- 基因E、D、C、B、A低表达 1、Trp操纵子与负控阻遏系统（一） （1）培养基中Trp 浓度较低 （2）调控蛋白R不能被活化 （3）未活化的调控蛋白R不能与操纵元件结合 （4）基因E、D、C、B、A高表达 2、Trp操纵子与负控阻遏系统（二） （1）培养基中Trp 浓度较高 （2）调控蛋白R与Trp结合 （3）Trp-R复合物与操纵子结合 （4）基因E、D、C、B、A低表达 （三）色氨酸操纵元总结 1、通常是开放转录的，有效应物（色氨酸为阻遏物）作用时则阻遏关闭转录。 2、负性调控的、可阻遏的操纵子 3、色氨酸可以作为共阻抑物起作用，并通过终产物抑制自身的合成（负反馈调节）。 4、细菌不少生物合成系统的操纵子都属于这种类型，其调控可使细菌处在生存繁殖最经济最节省的状态。 ?实验观察表明： 当色氨酸达到一定浓度、但还没有高到能够活化R使其起阻遏作用的程度时，产生色氨酸合成酶类的量已经明显降低，而且产生的酶量与色氨酸浓度呈负相关。 这种调控现象与色氨酸操纵子特殊的结构----衰减子有关。 一、特点 1、多层次 2、无操纵子和衰减子 3、个体发育复杂 4、受环境影响较小 二、真核生物基因表达调控的层次： 1、DNA水平调节 2、 转录水平调节 3、转录后水平的调节 4、翻译水平调节 5、翻译后加工的调节 一、重组DNA（ 基因克隆、分子克隆） 通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。 基因克隆的核心---体外重组(Recombination) 人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。 三、其他几个相关技术 Southern-blot 检测DNA Northern-blot 检