蛋白六质化学.ppt

2 蛋白质 广州大学生命科学学院 柯德森 问题 自然界共有20种氨基酸? 自然界的氨基酸全是L型的? α-AA? 自然界中组成蛋白质的AA全是L型的? 所有20种标准氨基酸都是L型的? 所有20种标准氨基酸的结构通式都是相同的? 所有20种标准氨基酸都有手性?都有旋光性? 问题 L型的氨基酸都是左旋光的? 同一种氨基酸的旋光方向与比旋光值是不变的? 测量奶粉中蛋白质含量可以用什么方法？ 氨基酸的等电点一般规律 羧基的电离大于氨基,所以只有一氨基一羧基的中性AA的pI值一般(略小于7)6左右 碱性AA的pI值大于7,酸性AA的pI小于6 氨基酸的pI值由其侧链所决定 处于pI点的AA容易沉淀 问题 说出20种标准AA的名字 极性和非极性AA分别有哪些? 碱性AA包括?酸性AA包括?芳香簇AA包括?杂环AA包括? 甲硫氨酸是极性AA?苯丙氨酸是极性AA? 色氨酸是极性AA? 什么叫AA的等电点?其本质是什么?决定AA等电点的因素是什么?各种氨基酸的等电点有哪些规律?如何计算或测定PI值? 问题 茚三酮反应的概念?所有AA茚三酮反应的颜色都是一样的? AA的甲醛滴定法的作用? 测定蛋白质N端AA种类和数量的方法有哪些?DNFB与DNS的作用及其差别? 氨基酸自动序列分析仪的技术原理是什么? 什么叫Ellman试剂?其作用是什么?什么叫Sanger试剂。 生物活性肽 Biological active peptide, BAP:是能够调节生物机体的生命活动或具有某些生理活性的寡肽或多肽的总称 小结 一级结构决定了蛋白质的主要性质和种族特异性 一级结构在一定程度上决定了蛋白质的高级结构 因此一级结构是蛋白高级结构及其功能的基础 小结 一定构象的蛋白质是其功能的体现的必要条件 正确的高级结构是蛋白发挥生物学功能的前提 蛋白定量法 紫外吸收法 凯氏定氮法 考马斯亮兰法 其他方法 蛋白质的分离纯化初步 材料及细胞破碎,膜蛋白和非膜蛋白,固液分离 初级分离阶段:盐析和丙酮(条件:低温、等电点)沉淀 等电点沉淀 除盐:透析\超滤\凝胶过滤 膜分离法:透析与过滤\超滤等 浓缩 电泳法 层析(层析前的准备):层析基本原理基础操作 蛋白质的氨基酸序列分析 纯化是关键 测序的过程:多肽链分离\二硫键断裂\氨基酸组成分析\N端测定\C端测定\多肽链裂解\肽段序列测定\推断序列\肽段拼接\二硫键确定 根据功能对蛋白质的分类 酶 调节蛋白 贮存蛋白质 转运蛋白质 运动蛋白 防御蛋白和毒蛋白 受体蛋白 支架蛋白 结构蛋白 异常功能蛋白 复习问题 蛋白质的氨基酸组成.肽、肽键 氨基酸的种类数,掌握谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸的基本性质及其英文缩写 20种氨基酸中的特别性质的氨基酸。Gly, Pro, 构型与旋光性，极性，等电点 复习问题 蛋白质的一级、二级、三级、四级结构一级结构包含，二级结构包含、三结构的特点、四级结构的成立条件。 结构域的概念 维持蛋白质空间结构的主要作用力 蛋白质的变性及沉淀。 问题 氨基酸的基本结构,结构式,构型,旋光性,注意Pro和Gly D型的AA一定是右旋光的,而L型的AA一定是左旋? 有手性碳的氨基酸一定具有旋光性?有手性碳的物质一定是旋光性物质? 天然氨基酸都具有一个不对称α-碳原子 亮氨酸的疏水性比丙氨酸强 蛋白质分子中所有的氨基酸(除Gly)都是左旋的 问题 自然界蛋白质和多肽物质均由L-氨基酸组成的. 一个化合物如能和茚三酮反应生成紫色,说明这个化合物是氨基酸、肽或蛋白质 维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。 维持蛋白质二级结构最重要的作用力是氢键。 蛋白质的一级结构在很大程度上决定它的构象。 蛋白质亚基与肽链是同义的 问题 在水溶液中蛋白质溶解度最小的pH值往往就是其pI值。 血红蛋白与氧结合有协同效应，肌红蛋白则没有。 溶液的pH值可以影响氨基酸的等电点 目前为止，自然发现的氨基酸有20种左右。 某蛋白质在pH6中向阳极移动，说明其等电点小于6 蛋白质分子量（M）与沉降系数（s）的关系 M = —————— RTs D（1－Vρ） R——气体常数（8.314×107ergs·mol -1 ·度-1） T——绝对温度 D——扩散常数（蛋白质分子量很大，离心机转速很快，则忽略不计） V——蛋白质的微分比容（m3·g-1） ρ——溶剂密度（20℃，g·ml-1） s——沉降系数 （二）蛋白质的两性电离及等电点 蛋白质在其等电点偏酸溶液中带正电荷，在偏碱溶液中带负电荷，在等电点pH时为两性离子。 电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。分子大小不同的蛋白质所带净电荷密度不同，迁移率即异，在电泳时可以分开。 1. 自由界面电泳：蛋白质溶于缓