细胞培养技术常见问题解答.PDF

细胞培养技术常见问题解答 一、 细胞培养基础问答 1.BHK 细胞就是指 BHK21 吗？ 答：BHK 细胞是指幼年叙利亚地鼠肾细胞（Baby Hamster Syrian Kidney），1961 年建株。原始的细胞株 是成纤维细胞，贴壁依赖性。1963 年获得单细胞克隆细胞。后经无数次传代后细胞可悬浮生长，它广泛用 于增殖各种病毒，生产兽用疫苗。 最常用的是 BHK21 的一个亚克隆细胞，即克隆 13 或 C13 。 2.二倍体细胞有什么特点？ 答：二倍体细胞的染色体组型是 2n 核型；贴壁依赖接触抑制；一般可传代 50 代；无致瘤性。如 W1-38 ： 正常胚肺组织人二倍体细胞系。MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系 。 3.什么是动物细胞大规模培养？ 答：所谓动物细胞大规模培养技术（large-scale culture technology）是指在人工条件下（设定 pH、温度、 溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可 大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、CHO （中华仓鼠卵 巢）细胞、BHK-21、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、 甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。 在过去几十年来，细胞培养技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培养， 发展为生物反应器（Bioreactor）进行大规模细胞培养。 4.细胞体内外培养的差别是什么？ 答：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日 久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化 获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件 下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际 上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。 5.什么是无血清培养基？与普通培养基有什么区别？ 答：无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖 的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。 添加组分可能包括纤连蛋白、层粘连蛋白等贴壁因子、胰岛素、转铁蛋白、硒等。 6.什么是无血清无动物组分培养基、无蛋白培养基和限定化学成分培养基？ 答：无血清无动物组分培养基是不含任何动物来源成份的无血清培养基，但可能添加植物蛋白或重组蛋白。 无蛋白培养基（protein free midium,PFM）:即不含有蛋白的培养基，无论是植物蛋白或动物蛋白。成分培 养基(chemical defined medium,CDM):是指培养基中的素有成分都是明确的，它同样不含有蛋白，也不是添 加了植物水解物，而是使用了一些已知结构与功能的小分子化合物，如短肽等。这种培养基更有利于分析 细胞的分泌产物和产品纯化。 7.HEPES 在细胞培养过程中起什么作用？ 答：HEPES 溶液：是一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培养基 pH 迅速变动。 在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境，CO2 气体迅速逸出，pH 迅速升高，若加 了 HEPES，此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加 HEPES。 8.CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？ 答：定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。 二、 培养基生产和使用常见问题 1. 低血清培养基能用肉眼判断其 pH 值吗？ 答：低血清培养基中酚红的含量与普通培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定 pH 值，建议使用 pH 计进行测定。 2.低血清培养基的缓冲系统是什么？ 答：平衡盐一般是由无机盐及葡萄糖组成的。平衡盐有 Hanks′系统、Earle′s 系统、Dulbecco′s 磷酸缓冲盐 系统等。199 系列培养基、MEM 系列培养基均有 Hanks′系统的培养基及 Earle′s 系统的培养基。但是有些 培养基均不是以上常规的平衡盐系统，例如 RPMI 1640 培养基、F12 培养基。MEM(SLM)低血清培养基的 平衡盐系