疏水作用色谱填料研究进展.PDF

文献综述 疏水作用色谱填料研究进展 李玉龙 孙 彦 胡宗定 天（津大学化工系 天津 300072） 提 要 疏水作用色谱法 H（IC）是一种有效的蛋白质分离纯化方法。综述了HIC填料的基质和配基的发展过 程，举例说明了不同HIC填料对蛋白质的分离纯化效率，指出了制备型HIC填料的现状及其发展趋势。 关键词 疏水作用色谱法，色谱填料，蛋白质 分类号 O658 1 前言 目标的关键因素。HIC填料除了要具备流动性好、机 疏水作用色谱法(hydrophobic-interactionchro- 械强度高、化学稳定性好等特点外9,（14），还必须满足 一些特殊要求15（）:1（）有足够的亲水性，保证填料在 matography,HIC)的名称最早由Hjert ?1（）引用来 溶解生物大分子及其片段的水介质 即（发生疏水作 描述 “盐析”时以盐的水溶液为流动相、弱疏水性多 用的介质）中得到净化，同时，该介质易于保持生物 糖凝胶为色谱填料分离纯化蛋白质等生物大分子的 分子活性；2（）有足够数 目的疏水结合中心，这些中 洗脱色谱技术的。尽管基本滞留机理与反相色谱法 心要尽可能均匀一致，以便产生相同、适宜的结合 R（PLC）相同，但HIC填料表面的疏水基团密度远 力，从而使生物分子的变性最小。为此，必须平衡 低于RPLC填料，不需用酸性或有机溶剂来洗脱生 HIC填料以满足这两个相反性质的要求。例如，对琼 物分子2（～5）。一般来讲，HIC流动相与绝大多数蛋白 脂糖的烷基衍生物而言，亲脂基团的数目少，则结合 质相容，其温和的疏水作用更易于保持生物分子的 容量低；但亲脂基团的数目过高，凝胶的润湿会降 天然结构和活性 （）。此外，盐析是蛋白质分离过程中 低，且非极性部分过大会增加生物分子变性的危险。 常用的初级分离步骤，可方便地将高离子强度的活 通常，HIC填料是在基质表面的间隔臂(spacer- 性组分直接吸附到疏水柱上并通过降低盐梯度洗脱 arm)上键合具有疏水作用的配基而制得。间隔臂指 得到纯组分。目前，HIC已成为与离子交换色谱法 的是亲水基质表面的活性官能团，可以通过对惰性 I（EC）、亲和色谱法 A（C）不相上下的分离纯化生物 基质的化学修饰得到。其中的基质性能及配基疏水 活性蛋白质和多肽等大分子的重要手段7（～?10） 程度对色谱填料的分离效果均有显著影响，需要分 早期的疏水色谱填料是将烷基胺连接到琼脂糖 别讨论。 凝胶表面制备得到，吸附的蛋白质一般使用变形缓 2.1疏水填料的基质 冲液(deformedbuffer)如咪哇-柠檬酸等洗脱，但这