出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法资料.pdf

出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌 检验方法 Method for the examination of Listeria monocytogenes in foods for export SN 01 84— 93 1主题内容与适用范围 本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法。 本标准适用于牛乳、乳制品、水产品、肉及肉制品食品。其他食品可参照采用。 2原理 0 单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患疾病的致病菌。在胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA— YE)、选择性培养基(MMA)等平板上用45 角斜射光 照射可观察到蓝色菌落；水解七叶苷并与柠檬酸铁铵反应产生黑色菌落。 3设备和材料 3.1微生物学实验室常用设备。 3.2解剖镜。 3.3斜射灯。 3.4平面镜。 4培养基和试剂 4.1 培养基 4.1.1 胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE)(见B1)。 4.1.2 胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)(见B2)。 4.1.3 增菌培养液(EB)(见B3)。 4.1.4 选择性培养基(MMA)(见B4)。 4.1.5 牛津琼脂(OXA)(见B5)。 4.1.6 改良缓冲蛋白胨水(MBP)(见B6)。 4.1.7 7％羊血琼脂(见B7)。 4.1.8 糖发酵培养基(见B8)。 4.1.9 半固体琼脂(见GB 4789.28中3.28条)。 4.1.10 尿素琼脂(见GB 4789.28中2.15条)。 4.1.11 硝酸盐培养基(见GB 4789.28中2.17条)。 4.1.12 MR-VP培养基(见GB 4789.28中2.4条)。 4.1.13 三糖铁琼脂(TSl)(见GB 4789.28中3.24条)。 4.2 试剂 4.2.1 胰酪蛋白胨(或胰蛋白胨)。 4.2.2 盐酸吖啶黄素。 4.2.3 萘啶酮酸。 4.2.4 复达新。 中国仪器之家 / 4.2.5 甘氨酸酐。 4.2.6 氯化锂。 4.2.7 苯乙醇。 4.2.8 放线菌酮。 4.2.9 多粘菌素E。 4.2.10 头孢双硫唑甲氧。 4.2.11 磷霉素。 4.2.12 柠檬酸铁铵。 4.2.13 七叶苷。 4.2.14 酚红。 4.2.15 D— 葡萄糖。 4.2.16 D— 甘露醇。 4.2.17 哥伦比亚琼脂。 4.2.18 酵母浸膏。 4.2.19 牛肉浸膏。 5检验步骤 5.1样品 如为冷冻食品，应于2～5℃解冻，且不超过18h；若不能及时检验，应置于-15℃保存。非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置 于4℃冰箱保存，在24h之内检验。 5.2前增菌和增菌 5.2.1前增菌：巴氏消毒乳、乳制品、冷冻水产品，冻肉及其它加工食品均应进行前增菌。无菌操作称取25g样品，加入装有225 mL改良缓冲蛋白胨水 (MBP)的均质杯内，高速均质l～2min，制成1：10样品匀液，转入500mL广口瓶内；液体食品可用吸管吸取25mL样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨 水(MBP)的广口瓶内，充分振摇制成1：10样品匀液，于30℃培养18～24 h。移取1 mL，转种于100mL增菌培养液(EB)内，于30℃培养24、48h，分别进 行分离。 5.2.2直接增菌：生乳、鲜肉及未经加工处理过的样品不必经过前增菌。检验时，以无菌操作取25 g (25mL)样品，按前法所述，用225 mL增菌培养液 代替改良缓冲蛋白胨水制成1：10样品匀液，于30℃培养24和48h，分别进行分离。 5.3分离 5.3.1取增菌液一环，划线接种于选择性培养基(MMA或OXA)平板上，于35℃培养24～48h。 5.3.2斜射光镜检：将解剖镜、斜射灯、平面镜，如图1所示装置，使光源以45° 角照射