传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其抗性基因对-中国水产科学.PDF

中国水产科学 2018 年 1 月, 25(1): 220227 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17148 传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其抗性基因对环境细菌 抗性的影响 1, 2 1 1 1 1 1 1 1 李渊 , 赵景壮 , 刘淼, 卢彤岩, 任广明 , 尹家胜 , 纪锋 , 徐黎明 1. 中国水产科学研究院 黑龙江水产研究所, 黑龙江 哈尔滨 150070; 2. 上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306 摘要: 本研究以传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV)分离株XJ-13 为研究对象, 克隆其糖蛋白(glycoprotein, G)基因并连接到商业化载体pcDNA3.1(+), 成功构建了真核表达载体pIHNxj-G 。为了 检测该载体作为核酸疫苗的可能性, 本研究以 2 μg/尾的剂量采用背鳍基部注射免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼 苗[(5±0.5) g]。在免疫后第4 天及第30 天, 以100 TCID50 的剂量利用IHNV-XJ-13 对虹鳟进行腹腔注射攻毒; 在免 疫后第4 天及第7 天, 利用Real-time PCR 技术检测虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1 基因表达情况; 在免疫后 第4 天及30 天检测虹鳟血清IHNV 中和抗体效价; 在免疫后65 d 内, 分别于不同时间点采集循环水池里的粪便、 水以及虹鳟的肠内容物, 进行氨苄青霉素抗性菌的分离鉴定。攻毒试验结果显示, 核酸疫苗在免疫后第 4 天和第 30 天的相对保护率均高于90%; Mx-1 基因检测结果显示, Mx-1 基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达; 中 和抗体效价测定结果显示, 在免疫后第 4 天, 所有血清中均不存在中和抗体(效价均20); 而在免疫后第 30 天, 10 尾虹鳟中有 8 尾血清中存在中和抗体, 最高效价为 160; 抗性菌分离结果显示, 分离到的氨苄青霉素抗性菌均是天 然具有氨苄青霉素抗性的气单胞菌(Aeromonas sp.)和柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.), 并未分离到包括大肠杆菌在内的 任何具有氨苄青霉素抗性的指示菌, 且实验组和对照组的氨苄青霉素抗性菌的种类和数量均没有发生统计学意义 的改变。本研究提供了具有良好保护效果的IHN 核酸疫苗, 并为IHN 核酸疫苗的安全评价提供了基础数据。 关键词: 传染性造血器官坏死病毒; 核酸疫苗; 抗性基因; 氨苄青霉素; 环境释放 中图分类号: S941 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2018)01022008 [2-3] 传染性造血器官坏死病毒(Infectious Hema- 中国为二类疫病 。目前国内外学者针对IHNV topoietic Necrosis Virus, IHNV)隶属于弹状病毒科 已经开展了疫苗的研发、免疫佐剂及病毒复制干 (Rhabdoviridae)诺拉外弹状病毒属(Novirhabdovi- 扰物的筛选等大量研究[4-6] 。研究过程中发现核酸 rus), 是传染性造血器官坏死病(Infectious Hema- 疫苗在诱导鱼类的体液免疫和细胞免疫反应方面 topo