抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光判读与讲解.pptVIP

* * * * * * * * * * * 实验结果与理论知识不符，以ANCA为例 * 对IFT为C-ANCA，靶抗原为MPO做解释。 * * * 对前面做总结，要联合使用两种方法学检测ANCA，联合使用多基质检测ANCA（IIFT），定量检测ANCA（IIFT,ELISA） * * 强调单独使用IIF法或特异性ELISA法是不完善的，需要两种方法学联合使用（IIFT+ELISA or IIFT+EUROLine），提高检出率 强调IIFT检测ANCA时可受影响因素： ANA干扰，建议联合使用多种基质尽最大可能排除干扰 * 强调定量和半定量的重要意义： 定量检测可监测疾病的活动性以其确定与原发性系统性小血管炎的相关性 * * ANA + pANCA （甲醛敏感） 粒细胞 (乙醇固定) 猴肝 HEp-2 cells 粒细胞 (甲醛固定) 1 3 4 2 粒细胞 (乙醇固定) 粒细胞 (甲醛固定) 猴肝 HEp-2 细胞 1 3 4 2 ANA干扰 ANCA阴性 EUROIMMUN 猴肝 HEp-2 细胞 粒细胞 (乙醇固定) 粒细胞 (甲醛固定) 1 3 4 2 阴性 EUROIMMUN 猴肝 HEp-2 细胞 粒细胞 (乙醇固定) 粒细胞 (甲醛固定) 1 3 4 2 甲醛抗性pANCA EUROIMMUN 猴肝 HEp-2 细胞 粒细胞 (乙醇固定) 粒细胞 (甲醛固定) 1 3 4 2 甲醛抗性pANCA 猴肝 HEp-2 细胞 粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定) 1 3 4 2 ANCA阴性 ANCA常见问题答疑 关于ANCA： 理论知识： 一、实验结果与理论知识不符 荧光模型 靶抗原 C-ANCA PR3 P-ANCA（甲醛抗性） MPO P-ANCA（甲醛敏感） Other (BPI, LF……) IFT为C-ANCA，靶抗原为MPO 结果的解释（1） 作者证明了抗MPO抗体成为C-ANCA的原因：抗MPO抗体为一组异质性抗体，其中某个亚群的靶抗原（即MPO蛋白）被与乙醇反应后不会向胞膜移动。 IFT为C-ANCA，靶抗原为MPO 样本稀释后实验结果：IFT为强C-ANCA+弱pANCA 靶抗原结果为：弱MPO + 强BPI 结果的解释（2） 提醒： 强C-ANCA有时会掩盖弱pANCA; ANCA的靶抗原检测多数医院还是很有局限 ANCA谱 ELISA-可同时检测6种靶抗原 蛋白酶 3 乳铁蛋白 髓过氧化物酶 弹性蛋白酶 组织蛋白酶 G BPI (CAP57) cANCA pANCA cANCApANCA 二、检测方法学选择上的问题 仅RP3和MPO 仅定性，无定量 单基质/两基质片， 未排除ANA干扰 仅IIF 临床应用范围受限 降低疾病特异性 假阳性 给临床信息少 国内ANCA临床常规检测存在的问题 两种方法联合使用，可提高ANCA临床应用价值 原发性系统性小血管炎患者约5%IIFT阴性而ELISA阳性 ANCA检测方法的合理选择 据国内外报道，采用IIF在SLE中检测ANCA，阳性率差异很大， 16%-69%，主要为pANCA 仅采用乙醇片判断，ANA干扰大 据欧蒙检测数据，SLE中单独采用乙醇固定抗原片检测ANCA，由于 ANA干扰可产生31.2%的假阳性结果，主要为均质型的ANA（占77.8%） 推荐：IIF法检测ANCA提倡应用组合抗原片（甲醛固定片、乙醇固 定片、Hep-2细胞片等），综和判断结果，避免ANA干扰，提高 ANCA临床应用价值 ANCA IIF法检测的影响因素-ANA 需求：抗PR3及MPO抗体滴度与病情活动一致→疗效判断、复发指标 特异性：低效价MPO抗体偶见于CTD患者等非血管炎患者，高滴度的 抗MPO抗体更多见于原发性小血管炎 结论：临床常规检测ANCA应报告定量或半定量检测结果。 IIF法：将血清作倍比稀释后（1:10、1:100）检测 ELISA法：应选择可定量或相对定量的检测试剂盒 三、ANCA的定量或半定量检测的选择 Thank you! * * * * * * 着重讲ANCA荧光染色成因：中性粒细胞使用乙醇和甲醛固定，甲醛固定时，ANCA只表现c-ANCA，而无p-ANCA。此固定方法由于甲醛的强固定作用细胞浆中ANCA抗原如MPO不能从嗜天青颗粒中释放，表现为胞浆内均一的荧光染色即c-ANCA。用无水乙醇固定时，MPO等抗原物质可以从嗜天青颗粒中释放出来，由于电荷作用吸附在细胞核周围形成p-ANCA * *