NY/T 553-2002禽支原体病诊断技术.pdf

ICS11.220 B41 NY 中华 人 民共和 国农 业 行业标 准 NY/T553-2002 禽支原体病诊断技术 Diagnostictechniquesforavianmycoplasmosis (mycoplasmagallisepticum) 2002一08一27发布 2002门2一01实施 中华人 民共和 国农业部 发 布 NY/T553-2002 目11 舀 禽支原体病(avianmycoplasmosis)又称鸡败血支原体(mycoplasmgallisepticum，简称MG)，常引 起鸡的慢性呼吸道疾病。MG也可感染火鸡，引起传染性窦炎。世界动物卫生组织仁worldOrganization forAnimalHealth(英),OfficeInternationaldesEpizooties(法),OIE]将本病例B类动物疫病，我国将 其列为二类疫病。 本标准规定的方法与OIE诊《断试验与疫苗标准手册》推荐相应方法一致。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:农业部动物检疫所。 本标准起草人:郭福生、尹燕博、蒋正军、孙淑芳、陆明哲、龚振华。 NY/T553-2002 禽支原体病诊断技术 1 范围 本标准规定了禽支原体(MG)分离鉴定和快速血清凝集试验(RSA)的技术要求。 本标准适用于鸡和火鸡及其产品MG的检测。 2 禽支原体的分离和鉴定 21 材料准备 2.1门 培养基制备见附录A(规范性附录)。 2.1.2 兔抗MG阳性血清和抗免荧光抗体结合物。 2.2 分离 2.2.1 采样 活禽从鼻腔、食管、气管、泄殖腔和交合器中取样。死禽从鼻腔、眶下窦、气管或气囊采样，也可吸取 眶下窦和关节渗出物或结膜囊内冲洗物。对于鸡胚从卵黄囊内表面、口咽和气囊采样。 2.2.2 样品的处理 采样后应尽快培养。如须运输，小块组织置于支原体培养基中，拭子在培养基中用力搅拌数次，将培 养基运回实验室尽快培养。 2.2.3 接种 将样品0.2mI一接种于1.8mI支原体液体培养基中，依次10倍稀释至10-3，密封，3TC培养。同时 将样品接种于支原体固体培养基中，置于含5%-10%二氧化碳(COQ)培养箱中培养。 2.2.3.1每天检查液体培养基酸碱度，一旦发现pH值变化，立即接种于固体培养基中培养。若培养基 酸碱度没有变化，每隔3d-5d盲传一代，共传3代，培养10d后接种于固体培养基上培养 2.2-3.2 固体培养基上若有菌落生长，用低倍显微镜观察菌落，可见中央突起呈荷包蛋样(有时不典 型)，需进一步作血清学鉴定。 2.3 鉴定 2.3.1 用间接荧光抗体试验QFA)鉴定MG.取 1.0cm-1.5cm的琼脂块，菌落面朝上置于载玻片 上，第一块载玻片上放一块待检分离物、一块已知MG菌落((S或‘R株)、一块已知其他支原体菌落，第 二块载玻片上放一块待检分离物。 2.3.2 第一块载玻片上每块琼脂块上加一滴适当稀释的兔抗MG血清，第二块载玻片上琼脂块上加 一滴正常兔血清。 2.3.3琼脂块在湿盒中室温条件下反应30min后，分别放到含有磷酸盐缓冲液((PBS)(pH7.2)的不同 器皿中，冲洗 10min，共冲洗2次。 2.3.4 将琼脂块放回原玻片.吸水纸吸取过多的水分，每块琼脂加上稀释好的抗兔荧光抗体结合物，反 应、洗涤同前，最后将琼脂块放回玻片，吸干多余水分后于人射式荧光显微镜下检查结果 2.4 结果判定 菌落呈现亮绿色荧光时为阳性反应，若仅有暗淡的菌落轮廓，与背景荧光颜色差别不大为阴性。其 他已知支原体菌落、第