组织化血讲义汇总.pdf

　 组 织 化 学　　 讲 义 中国协和医科大学　 2005 年 10 月 目 录　　 第一节 概论…………………………………………………………………………………1　 第二节 非酶组织化学………………………………………………………………………6 　 1.核酸　 2.糖类--碳水化合物　 3.脂类　 4.蛋白质　 第三节 酶组织化学………………………………………………………………………16　 1.定义　 2.酶的保存及影响酶活性的因素　 3.酶的组化方法　 (1)金属阳离子沉淀反应　 4.酶组化的保温技术　 5.酶的超微细胞化学　 6.同功酶　 7.水解酶　 (1)碱性磷酸酶　 (2)酸性磷酸酶　 (3)腺苷三磷酸酶　 8.氧化还原酶类　 (1)氧化酶　 (2)脱氢酶　 第四节 免疫细胞化学………………………………………………………………………28 　 1.基本概念　 2.标本制备　 3.染色方法　 (1)免疫荧光间接法　 (2)免疫酶法　 免疫酶标间接法　 PAP 法　 双 PAP 法　 四步 PAP 法　 葡萄球菌 A蛋白--PAP 法　 ASPAPAP 法　 (3)免疫金属技术　 (4)亲和细胞化学　 (5)免疫双标记技术　 4.非特异性反应及对照实验　 5.应用实例　 第五节 放射自显影术……………………………………………………………………41 　 1.基本概念　 (1)定义　 (2)原理　 (3)放射性同位素　 (4)感光材料　 (5)照相处理　 (6)应用范围　 2.方法简介　 (1)宏观自显影　 (2)光学显微镜自显影　 (3)电子显微镜自显影　 3.双标记自显影　 4.应用实例　 第六节 定量细胞化学………………………………………………………………………53 　 1.概念　 2.离心技术　 3.激光扫描共聚焦显微镜技术　 4.流式细胞仪　 5.参考资料　 第七节 原位杂交……………………………………………………………………………61 　 1.概念　 2.基本操作程序　 (1)取材　 (2)固定　 (3)标本制备　 (4)杂交前处理　 (5)杂交反应　 (6)杂交后处理　 (7)杂交体的检测和对比染色　 (8)对照试验　 3.原位PCR　 (1)直接法原位 PCR 　 (2)间接法原位 PCR 　 第八节 实验指导……………………………………………………………………………72 　 1.核酸的显示　 2.糖原的显示　 3.油红O 示中性脂肪　 4.钙-钴法示碱性磷酸酶　 5.琥珀酸脱氢酶的显示　 6.硫化铅法示酸性磷酸酶　 7.ConA 的亲和组织化学实验　 8.ABC Kit 用于免疫细胞化学实验　 9.SP Kit 用于免疫细胞化学实验 10.定量细胞化学的实验技术 第八节 实验指导 核酸的显示 实验原理： 稀盐酸水解 DNA ，破坏嘌呤和去氧核糖间的配糖键，形成醛基，与 Schiff 试剂结 合成为醛染料产物，恢复了品红的醌状结构,显示红紫色。 步骤(组织经 Carnoy 液固定，石蜡切片后) 1. 切片脱蜡到水。 2. 蒸馏水 60°C,1 分钟。 3. 1N-HCl 60°C,水解 8-10 分钟。 4. 1N-HCl 1 分钟。 5. Schiff 试剂 1 小时。 6. 亚硫酸盐溶液洗三次，总时间 6 分钟。 7. 流水洗 5 分钟，蒸馏水洗。 8. 1%亮绿 2 分钟（可省略）。