NY/T 538-2002鸡传染性鼻炎诊断技术.pdf

ics11.220 B41 .Y 中华人 民共和 国农 业行 业标 准 NY/T538-2002 鸡传染性鼻炎诊断技术 Diagnostictechniquesforinfectiouscoryza 2002一08一27发布 2002一12一01实施 中华人 民共和 国农业部 发 布 NY/T538-2002 前 言 鸡传染性鼻炎(IC)是由副鸡嗜血杆菌((hpg)引起的一种鸡的急性上呼吸道传染病，本病在世界各 地均有发生，主要引起蛋鸡产蛋率下降、生长发育鸡群的生长受阻及淘汰率增加，造成很大的经济损失。 副鸡嗜血杆菌通常分为A,B,C三个血清型，在我国能引起传染性鼻炎的菌型目前为A型和C型， 它们具有共同抗原和各自的型特异性抗原，可以通过检测这些型特异性抗原来鉴定hpg的血清型。 本标准提供了多种诊断鸡传染性鼻炎的方法，在使用中应根据鸡群发病后至诊断时的间隔时间长 短及使用单位的具体情况选择使用。建议在鸡群发病早期采用病原的分离鉴定或聚合酶链反应((PCR) 方法进行诊断，感染一周以后可以采用血清平板凝集试验进行诊断，两周后可以采用琼脂扩散试验、间 接酶联免疫吸附试验(ELISA)和阻断ELSIA进行诊断，三周后以上各种检查抗体的方法均可使用。 本标准的附录A、附录B,附录C、附录D、附录E、附录F为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:北京市农林科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人:苗得园、陈小玲、张培君、陈葵、宋程、龚玉梅。 NY/T538-2002 鸡传染性鼻炎诊断技术 1 范围 本标准规定了检测副鸡嗜血杆菌的细菌分离鉴定方法、PCR技术以及检测副鸡嗜血杆菌特异性抗 体的血清平板凝集试验、血凝抑制试验、间接酶联免疫吸附试验、阻断酶联免疫吸附试验的操作方法。 本标准适用于鸡和其他易感动物的传染性鼻炎的诊断。 2 细菌的分离鉴定 2.1 材料准备 2.1.1 无菌棉拭子、鲜血琼脂平板培养基 2.1.2 产烟酞胺腺嘿吟二核昔酸(或辅酶 NAD)表皮葡萄球菌。 2.2 操作程序 2.2.1 无菌打开可疑病鸡的眶下窦，用灭菌棉拭子蘸取其中粘液或浆液。 2.2.2 用棉拭子在鲜血琼脂平皿上横向划线 5-7条，然后取产NAD表皮葡萄球菌从横线中间划一 纵线。 2.2.3 将划种好的平皿置于5%的二氧化碳(COQ)培养箱中37℃培养18h-24h. 2.2.4 观察菌落特点。 2.2.5 取分离物做过氧化氢酶试验，必要时通过进一步的生化反应做详细的特征鉴定。副鸡嗜血杆菌 的生化反应特点及过氧化氢酶试验方法见附录A, 2.2.6 也可采用PCR鉴定可疑菌落，同时取病料或可疑菌落进行动物试验，方法见附录B, 2.3 结果判定与表示方法 若鲜血琼脂培养基上出现 “卫星样”生长的露滴状、针头大小的小菌落，即靠近产NAD表皮葡萄球 菌线处菌落较大，直径可达0.3mm，离产NAD表皮葡萄球菌线越远，菌落越小，过氧化氢酶阴性，结果 判为阳性，记为“+”，若无卫星现象，但有露滴状、针头大小的小菌落出现且过氧化氢酶阴性，则仍需采 用PCR或动物试验鉴定，以避免漏检不需NAD的副鸡嗜血杆菌。若无上述现象，则判为阴性，记为 3 聚合酶链反应(PCR)技术 3.1 材料准备 11.1PCR反应液、消化液、阴、阳性对照物，按说明书保存和使用。 3.1.2 石蜡油、生理盐水、蒸馏水、1.5mL及0.5mL小离心管、吸头若干，均经灭菌处理。 3.1.3PCR仪、56℃水浴锅、微量加样器、小型高速离心机、冰块等。 3.1.4 琼脂糖、电泳仪、水平电泳槽、紫外检测仪。 3.1.5 10mg/mL嗅化乙锭，加样缓冲液，TAE电泳缓冲液，配制