茶黄素和egcg与抗坏血酸协同诱导癌细胞凋亡机理研究茶学专业论文.docxVIP

摘要多酚类的抗氧化作用被认为是茶叶防癌和抗癌最重要的作用机理．大量的生 摘要 多酚类的抗氧化作用被认为是茶叶防癌和抗癌最重要的作用机理．大量的生 物体外、生物体内研究和流行病学调查等都证实绿茶儿茶素具有良好的抗氧化功 效．红茶在世界上茶叶消费量中占78％，茶黄素由绿茶多酚氧化聚合而来，是红 茶的品质元素。所以近年来茶黄素的研究成为茶叶研究的热点．本研究采用体外 和细胞实验评估了EGCG和TF3的抗氧化活性，研究了EGCG和TF3与维生素 C对癌症细胞的联合作用效果并从MAPK途径入手进行了机理的探讨． 主要研究结果如下： 1．对茶黄素单体(TFl、TF2A．TF2B和TF3)清除超氧阴离子自由基、单 线态氧自由基．过氧化氢、羟自由基和DPPH自由基的能力进行了研究，以EGCG 为对照．结果表明，对超氧阴离子自由基的清除能力为：TFITF2BTF2A 11P3EGCG；对单线态氧自由基的清除作用能力为：TF2BTFITF3TF2A EGCG；对过氧化氢的清除作用为：TF2B=TF3TF2ATFIEGCG；对羟自 由基的清除能力为：TF3TF2BTF2AEGCGTFI；对DPPH自由基的清除 作用为：TF3=EGCGTF2A≈TF2BTFI． 2．利用AM!法计算茶叶儿茶素的HOF值，并通过对物质构效关系和实验 结果加以相互印证，提出了以HOF值来预测和表征茶叶中多酚类抗氧化能力的 方法．对儿茶素的评估结果显示EC、EGC、ECG和EGCG的HOF值分别为 ·213．58、-252．96、．322．44和．383．99，HOF值越低其抗氧化性越强，与实验所得 结果4种儿茶素的抗氧化活性的强弱顺序相符合：EGCGECGEGCEC．TFl， TF3，EGCG和维生素c的HOF分别为．389．35。，-654．13、．383．99和．232．18， 从此可以看出抗氧化性最好的是TF3，另外TFl的抗氧化性可与EGCG媲美． 3．采用Chou氏公式评估了EGCG和维生素C、TF3和维生素C的联合抑 制肺癌细胞的生长作用．结果表明，维生素C和TF3以l：10比率可以对肺癌 A549细胞产生拮抗作用和协同作用，在低抑制率时显示拮抗作用，当抑制宰大 于82．5l％时显示协同．维生素C与EGCG的联合作用更为复杂，呈现波浪形效 果，联合抑制率小于49．8％时和抑制率大于80．3％时CI值呈现下降的趋势．在 协同抑制率为32．0％和65．6％之间时两者为协同关系。维生素C与TF3、维生素 协同抑制率为32．0％和65．6％之间时两者为协同关系。维生素C与TF3、维生素 c与EGCG以6：l的比率联合抑制SPC—A一1细胞，分别当联合抑制率大于54．4％ 和45．5％时分别显示协同效果．药物处理SPC．A—l细胞后G0／G1期的阻滞增加， 其中TF3处理处于G0／G1期的最高，达到65．3％。处理TF3+Ve和EGCG+Vc 后G0／G1期由53．9％分别增加到了62．8％和60．0％．其中TF3+Vc这一处理把S 期由46．1％减少到23．8％，细胞的凋亡率由1．0％增加到了22．3％．说明TF3和 Vc联合对sPC-A．1癌细胞是从引起细胞周期阻滞和诱导凋亡两方面作用的。 4．在对细胞信号通路的研究中发现，TF3+Vc对SPC．A-l细胞中的caspase 3的活性为TF3单独使用时easpase 3活性的1．64倍；ECA．109细胞中EGCG+Vc 处理的easpase 3的活性显著高于EGCG单独使用时caspase 3的活性，高达3．29 倍；SPC．A．1细胞的easpase 9活性检测结果显示，EGCG+Vc处理后caspase 9 的活性为EGCG单独作用时的活性的2．90倍；EGCG+Ve处理和TF3+Vc处理后 的ECA．109细胞easpase 9活性分别小于EGCG和TF3单独处理．EGCG、TF3、 EGCG+Ve和TF3+Ve可通过MAPK通路中的ERK，JNK和p38三条途径诱导 SPC—A．1肺癌细胞凋亡，而Ve只能通过ERK途径诱导该细胞凋亡．TF3和 TF3+Vc处理可通过ERK和JNK途径诱导ECA．109食道癌细胞凋亡，EGCG和 EGCG+Ve可通过JNK和p38途径诱导ECA．109食道癌细胞凋亡，Vc只能通过 p38途径诱导ECA．109细胞凋亡． 关键词：儿茶素；茶黄素；维生素c；超氧阴离子；单线态氧；过氧化氢；羟自 由基；DPPH；协同作用；A549细胞；SPC-A．1细胞；ECA．109细胞；细胞周期； 细胞凋亡；easpase 3；easpase 9；MAPK信号转导通路 AbstractThe Abstract The antioxidant effects of tea polyphen