三维人工皮肤构建及鼠李糖脂促皮肤伤口愈合研究生物化工专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 11 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者虢 婶弦 签字吼卅6年 6月哆日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝’江太堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权监 婆盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 圳毛玉 导师签名： 主琴 签字日期：列6年6月f弓日 签字日期：‘弘，5年 6月f3日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编 致谢三年前，我来到梦寐以求的浙江大学求学，这三年，经历了很大的蜕变，首 致谢 三年前，我来到梦寐以求的浙江大学求学，这三年，经历了很大的蜕变，首 先要感谢我的的导师孟琴教授和沈老师的悉心指导，从最基本的实验操作到文献 阅读能力以及对课题的设计都是孟老师一步步帮助我一步步提高，在研究遇到困 难时，孟老师和沈老师悉心引导，并鼓励我走出困境，经过不断的思考和对比文 献总能找到新思路。两位老师不仅在我研究工作中悉心教导，还在论文撰写倾注 大量心血，不仅如此，两位老师还教会了我比较好的实验习惯，这些实验习惯不 仅使我顺利的完成了我的研究生课题，还将在我今后的工作和生活中继续发挥作 用。导师渊博的学识、严谨的治学态度、敏捷的思维、一丝不苟的做风，是我一 生学习和借鉴的榜样。 感谢我的师姐姜丽芳博士在课题完成过程中，教会我良好的实验习惯，并在 研究过程和分析总结的时候给予的指导、关怀和帮助。感谢我的师兄龙旭伟、钟 亮、师姐张倩、刘浩静、代圆圆，同窗潘俊丽，师弟邵炳、彭彬、周超俊、师妹 丁思彤在实验和生活上给予的关心和帮助。 感谢我的室友朱潇莉，好友游春万以及许许多多本校及外校的同学和朋友。 最后感谢我的家人一直以来对我无微不至的关爱，及经济上对我无条件的支 持和精神上的鼓励。 刘钰 2016年5月 万方数据 摘要皮肤是人体最大的器官，其不仅作为与外界环境接触的屏障，还起到维持体 摘要 皮肤是人体最大的器官，其不仅作为与外界环境接触的屏障，还起到维持体 内稳态的作用。由于烧伤和慢性愈合伤口的大量发生，自体皮肤移植不足以满足 皮肤移植的需求，这使人工皮肤受到越来越多的关注。其中，包含表皮层与真皮 层的3D人工皮肤更接近真实的皮肤，在移植及作为皮肤研究模型上的应用价值 明显高于其他人工皮肤。本文采用自行分离和培养的原代人皮肤成纤维细胞与角 质细胞，并优化3D人工皮肤的构建，在降低成本的基础上获得更好的人工皮肤。 此外，鼠李糖脂是一种优良的生物表面活性剂，具有优越的表／界面活性、低毒 性等特点，在医药领域有广阔的应用前景。本文利用体外模型考察鼠李糖脂对皮 肤伤口愈合和抗疤痕修复的作用。 首先，从小儿环切手术后的包皮中分离原代人皮肤成纤维细胞和角质细胞。 研究发现，角质细胞在原代成纤维细胞饲养层上的增殖情况优于鼠成纤维细胞系 (NIH3T3)饲养层；饲养层的接种密度对角质细胞的生长有很大影响，其与角 质细胞接种密度为1：l时，角质细胞的增殖最优。此外，消化角质细胞的酶也在 很大程度上影响细胞活率和增殖，国产的胰酶不能将角质细胞消化下来，且对细 胞的损伤大，而胰酶替代物TrypLETM可以用来消化角质细胞，且对细胞的损伤 小。 其次，将角质细胞接种于胶原包埋的成纤维细胞，气提培养获得3D人工皮 肤。本文比较角质细胞增殖培养基Epi l中钙离子的含量对表皮形成的影响，发 现与高钙培养基相比，不含钙或低钙的培养基培养皮肤时，可获得更完整的表皮 层。随后，本文采用鼠尾和牛尾I型胶原构建真皮层，比较两者的收缩性，测量 人工皮肤的水接触角以考察其疏水性，并以苏木素一伊红染色(HE)、天狼猩红及 免疫荧光染色进一步表征人工皮肤的组织形态。结果显示，牛尾I型胶原制作的 皮肤在培养21天时，其面积只下降了21％，而鼠尾I型胶原制作的皮肤收缩至 原来的一半。牛尾