蛋白磷酸酶ppm1a调控胞质rna检测通路的功能与机制研究细胞生物学专业论文.docxVIP

塑堑型型丝L一． 塑堑型型丝L一．——————————————————————————————————————————————————————————一 墼塑H目J 最后，感谢我的家人和朋友，多年来你们一直为我默默地付出，一直支持着 我，你们是我坚强的后盾和心灵的港湾。在最艰难的岁月，正是因为你们的陪伴 和鼓励，我才能勇敢面对生活，一直走到今天，并将继续坚定走下去! 向尉文 2016年3月16日 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 蛋白磷酸酶PPMlA调控胞质RNA检测通路 的功能与机制研究 浙江大学生命科学研究院 细胞生物学方向 硕士研究生 向尉文 导 师 冯新华教授 徐平龙教授 中文摘要 由胞质核酸检测通路起始的抗病毒固有免疫应答是宿主细胞防御RNA／DNA 病毒入侵的主要机制之一。当病毒入侵宿主细胞后，通过逐次激活胞质内的核酸 感知受体，膜偶联的结头蛋白MA、，S／STING，蛋白激酶TBKl／IKKg，及信号中介 蛋白转录因子IRF3，宿主细胞能快速响应病毒侵入，生成多种I型与III型干扰素， 及数百干扰素诱导产物，建立抗病毒状态抑制病毒入侵。但目前关于胞质核酸检 测途径的磷酸化与去磷酸化调控以及细胞如何保持抗病毒应答的静息状态还所知 甚少。 通过蛋白磷酸酶组学筛选，我们发现金属依赖的蛋白磷酸酶PPMlA，依赖于 其丝苏氨酸磷酸酶活性，能够强烈抑制RIG—I受体起始的抗病毒固有免疫应答和宿 主细胞与个体的抗病毒能力。同时，在Cas9介导的PPMlA敲除的表皮细胞和 Ppmla-／-的巨噬细胞中，细胞对病毒的固有免疫应答和防御显著增强。而且PPMlA 基因敲除小鼠的抗病毒能力能显著增强；而PPMlA的转基因斑马鱼的抗病毒能力 显著减弱。在分子机制上，通过质谱分析、免疫共沉淀及免疫荧光，我们发现PPMlA 与TBKl／1KKe形成内源复合物，并且PPMlA能直接将处于激活状态的MAVS和 TBKl／IKKe去磷酸化，关闭信号复合体的形成，终止抗病毒信号。相反，活化的 III 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 MAVS也能干扰PPMlA与TBKl／IKKe复合物的形成，抵消PPMlA对抗病毒信号 的抑制作用。综上所述，我们的研究发现磷酸酶PPMlA是RIG．I介导的抗病毒固 有免疫应答的生理调节因子，并鉴定其是作用于MAVS的首个磷酸酶。本研究促 进了我们对胞质抗病毒通路的科学认知，并为抗病毒靶标的探寻提供了重要的理 论和实验依据。 关键词：PPMlA，MAVS，TBKl，磷酸酶，抗病毒固有免疫 创新点： 1． 鉴定PPMlA是细胞质RNA检测通路的生理调节因子； 2． 证实PPMlA调控细胞、小鼠和斑马鱼等宿主对RNA病毒的抗病毒防御； 3． 解释PPMlA是内源TBKl／IKKe复合物中的成分并能抑制TBKl／IKKe的活性， 而且PPMlA通过直接将MAVS和TBKl／IKKe去磷酸化来抑制抗病毒信号； 4． 证明PPMlA与MAVS竞争性结合TBKl／IKKa复合物决定细胞质RNA检测通 路的走向； 5． 在斑马鱼中建立可以快速评估抗病毒防御功能的病毒感染模型。 IV 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 Abstract Phosphatase PPMlA dictates the sensing of cytosolic RNA Cell Biology,Life Sciences Institute，Zhejiang University Postgraduate Weiwen Xiang Supervisors Xin—Hua Feng and Pinglong Xu Abstract Cytosolic RNA sensing is a prerequisite for initiation of innate immune response against RNA viral pathogens，Sig