生物型异种骨生物相容性细胞学及免疫学研究外科学骨外专业论文.docxVIP

博士学位论文 博士学位论文 骨组，A2组：Al组的对照组；和Bl组：交联的异种骨组，B2组：B2组的对照 组。在倒置相差显微镜下观察细胞的迁移情况，测定穿膜成骨细胞数量，评价 成骨细胞的迁移能力。 实验数据采用SPSS20．0统计软件进行分析，以均数士标准差(x+s)表示，实 验数据采用方差分析矛FILSD．t检验或Tamhane多重比较检验，P0．05为有统计学 意义。 结果： 1成骨细胞增殖活性培养l、3、5、7 d后在显微镜下观察可见实验组， 阳性对照组及阴性对照组成骨细胞形态均良好。实验组与对照组相比，随着培 养时间延长，OD值均升高，在1d、3d、5d、7 d时间点，三组间比较采用方差分 析和LSD．t检验，数据统计学分析显示同一时间点三个组间吸光度值两两比较 差别均无显著统计学差异(户O．05)，MTT法测定OD值可间接反应细胞增殖数 量，表明异种骨材料对成骨细胞增殖活性无不良影响，与成骨细胞相容性良 好，无明显细胞毒性。 2 PNPP偶氮法测定出ALP的OD值加入成骨诱导液后3天后在显微镜下观 察三个组的成骨细胞形态，结果显示三个组H．DMEM培养基中生长的成骨细胞 形态均良好，采用PNPP法测定OD值可间接反应细胞成骨能力，本实验结果显 示随着培养时间延长，三个组OD值均升高，表明三组细胞生长状态良好。三组 问比较采用方差分析禾IILSD．t检验，统计学分析结果显示3天及7天时3组间两两 比较均无显著统计学差异(P0．05)：2周及3周时，实验组及阳性对照组跟阴性 对照组比较差别均有显著统计学差异(P0．05)，实验组跟阳性对照组比较差 别有显著统计学差异(P0．05)。 3流式细胞术检测成骨细胞周期采用流式细胞术检i贝JJMillipore软件分析 实验结果显示：A组G0／G1、S、G2／M分别所占细胞周期百分比为： 70．10士1．1％、3．82士0．02％、16．56士0．02％；B组G0／G1、S、G2／M分别所占细胞 周期百分比为：70．10土0．20％、3．82+0．02％、16．56士O．01％；对照组G0／G1、S、 G2／M分别所占细胞周期百分比为：70．20士O．04％、3．86士0．02％、16．52士0．05％。 III 万方数据 摘要三组间比较采用方差分析禾NLSD．t检验，G0／G1、S、 摘要 三组间比较采用方差分析禾NLSD．t检验，G0／G1、S、 G2／M三组数据统计学分 析显示三组间两两比较差别均无显著统计学差异(P0．05)，可见三组细胞 G0／G1期、S期、 G2／M期分布比例相似，表明两种异种骨对成骨细胞细胞周期 均无不良影响。 4成骨细胞的迁移能力Transwell试验中通过在高倍镜下(x200)随机取5个 视野计数，计数每个视野的平均细胞数量评价成骨细胞在普通培养基与含异种 松质骨培养基的迁移能力。本实验中实验组随机取5个视野计得平均迁移的细 胞数目结果为：A1组：13．424-0．02个／视野，A2组：8．004-0．02个／视野；B1组： 13．414-0．02个／视野，B2组：8．004-0．07个／视野；两组间比较采用方差分析和 Tamhane多重比较，以均数4-标准差(X+s)表示，数据统计学分析显示A1与A2之 间比较有显著统计学差异(P0．05)；B1与B2之间比较有显著统计学差异 (P0．05)；A1与B1之间比较无显著统计学差异(P0．05)。 5细胞凋亡实验流式细胞仪结果经过Guava Nexin软件分析显示24d,时3 各组细胞凋亡率为A组：0．874-0．01％；B组：0．884-0．03％；C组：0．914-0．01％。 48小时3各组细胞凋亡率为A组：2．164-0．03％；B组：2．204-0．01％；C组： 6．194-0．06％。三组间比较采用方差分析和LSD．t检验，24h时，三组数据统计学 分析显示三组间两两比较差别均无统计学差异(P0．05)；48h时三组数据统计 学分析显示交联异种骨组与阴性对照组间比较无显著统计学差异(PO．05)，未 交联的异种骨组与阴性对照组间比较有显著统计学差异(P0。05)，未交联的异 种骨组与交联异种组间比较有显著统计学差异(P0．05)。说明24d,时内两种异 种骨共培养后不会影响成骨细胞的凋亡，48d,时时，交联的异种骨对成骨细胞 的凋亡无明显影响，然而这时未交联的异种骨对能够明显促进成骨细胞的凋 亡。 6溶血实验 肉眼下可见两种异种骨组离一t3管中上清液呈无色透明，与阴 性对照组管中的上清液颜色接近一致，无明显溶血现象发生；阳性对照组离心 管中上清液呈玫瑰红色，红细胞完全破裂溶解。实验材料中未交联异种骨组的 溶血率为1．13％，与阴性对照组相比无显著统计学差异(PO．0