bdrab40在桔小实蝇20e和insulin信号通路中的功能研究农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文1材料与方法 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 1材料与方法 ．．32 1．1实验材料 32 1．2实验方法 32 2结果与分析 ．．34 2．1 BdRab40序列分析 34 2．2 BdRab40的表达模式 37 2．3 20E和Insulin对尉砌b40的调控 40 2．4 I矾Ai研究BdRab40功能 ．42 3小结与讨论 ．．45 结论与展望 ．．48 参考文献 ．．49 攻读学位期间己发表论文 ．．58 致谢 ．．59 万方数据 BdRab40在桔小实蝇20E和Insulin信号通路中的功能研究摘要 BdRab40在桔小实蝇20E和Insulin信号通路中的功能研究 摘要 桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)是一种重要的果蔬害虫，寄主范围广 泛，能够造成巨大的经济损失。桔小实蝇雌虫羽化后，必须取食才能达到生殖成 熟，从而交配产卵，因此，研究桔小实蝇雌虫生殖及参与生殖的相关基因功能， 对桔小实蝇的防治具有重要意义。本研究首先研究了20E和Insulin信号通路在 桔小实蝇雌虫生殖中的重要作用，然后选取在雌虫初羽化与性成熟时期差异表达 的Rab家族基因BdRab40，研究20E和Insulin对该基因的调控作用及其在桔小 实蝇生殖中的功能。 1、20E和Insulin对桔小实蝇雌虫生殖的调控 为研究20E和Insulin信号通路在桔小实蝇雌虫生殖中的作用，我们检测了 20E信号通路的重要转录因子EcR、USP、E75、HR3和Insulin信号通路重要转 录因子／nR、IRS、Akt和Foxo在桔小实蝇雌虫不同发育阶段以及不同组织中的 表达模式，结果表明：EcR、USP、E75、InR、IRS、Akt和Foxo均在桔小实蝇 雌成虫的性成熟时期高表达，且主要是在卵巢组织中。 为进一步明确两条信号通路在桔小实蝇雌虫生殖中的功能，分别选取20E 和Insulin信号通路中在卵巢高表达的重要转录因子EcR、LISP、InR和Foxo，合 成dsRNA并进行显微注射RNAi。结果表明，干扰四个基因后均对桔小实蝇的 产卵造成影响，EcR、USP和InR干扰组的总产卵量及日均产卵量低于对照组， Foxo干扰组则高于对照组；并且四个干扰组中，EcR和InR干扰组均显著降低 了桔小实蝇Yolk Protein(YP)的表达。以上结果说明，20E和Insulin信号通路 通过影响桔小实蝇雌虫卵黄沉积和产卵调控其生殖。 2、桔小实蝇BdRab40的表达模式及功能研究 根据实验室已有的桔小实蝇转录组文库，我们获得了在桔小实蝇成虫阶段高 表达的BdRab40基因全长，编码区与其它昆虫Rab40的序列同源性均较高。时 空表达模式研究结果表明：该基因主要是在桔小实蝇性成熟雌虫中高表达，并且 卵巢中的相对表达量显著高于其它组织：此外，注射20E和Insulin后，BdRab40 的相对表达量都明显上调，而通过RNAi沉默两条信号通路EcR、USP、lnR和 i 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 Foxo基因表达后，均使BdRab40的相对表达量降低。以上结果说明，BdRab40 可能在桔小实蝇雌虫的生殖中发挥重要功能，并且受到20E和Insulin信号通路 的调控。 为进一步确定BdRab40在桔小实蝇雌虫生殖中的功能，显微注射干扰桔小 实蝇雌虫BdRab40，观察沉默该基因对桔小实蝇生殖的影响。结果表明：干扰 BdRab40后，与正常雄虫的交配率没有变化，但是桔小实蝇10．1id雌成虫的卵 巢组织相比于对照组不发育或发育不完全，并且雌成虫15d的总产卵量及日均产 卵量都显著低于对照组，而卵孵化率没有明显变化。RT-PCR检测结果表明，干 扰组YP的表达量显著降低。 以上结果表明，20E和Insulin信号通路均参与了桔小实蝇雌虫的生殖成熟： BdRab40受到了20E和Insulin信号通路的调控，能够影响桔小实蝇卵黄沉积、 卵巢发育以及产卵量，在桔小实蝇雌成虫的生殖中发挥重要作用。 关键词：桔小实蝇20E Insulin BdRab40生殖卵巢 万方数据 BdRab40在桔小实蝇20E和Insulin信号通路中的功能研究Abstract BdRab40在桔小实蝇20E和Insulin信号通路中的功能研究 Abstract Bactrocera dorsalis(Hendel)，which has a wide host range，is an important pest of fruits and vegetables and can cause huge economi