舌癌候选耐药新基因tcrp1介导顺铂耐药及机制研究病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 摘 要 背景与目的：舌癌是最常见的口腔颌面部恶性肿瘤，临床常规采 用手术并辅以化疗或放疗的综合治疗方法。由于化疗存在耐药且其机 制未予阐明，舌癌的治疗效果一直不太理想。本研究将围绕课题组前 期从舌癌多药耐药细胞(Tca8113／pym)中克隆的舌癌耐药相关基因 TCRPl的功能开展相关研究，为进一步阐述舌癌化疗耐受机制，逆 转舌癌耐药，提高舌癌临床化疗效果提供新的证据。 方法：(1)构建TCRPl真核表达载体，转染舌癌耐药亲代细胞 Tca81 13，筛选并挑取单克隆，建立TCRPl稳定表达细胞系 (Tca8113／TCRPl)；(2)MTT方法检测Tca8113／TCRPl细胞对平阳霉 素(Pingyangmycin，PYM)、顺铂(Cisplatin、cDDP)、5-氟尿嘧啶 (5-fluorouracil、5-Fu)、阿霉素(Adriamycin、ADM)、吡喃阿霉素 (TI-1P)等6种舌癌常用药物的敏感性，计算各药物的IC50值，筛 选TCRPl介导的耐受药物；(3)针对TCRPlmRNA序列设计干扰片 段，构建干扰表达质粒(pAU6+27／TCRPl．i)，瞬时转染TCRPl内源 性高表达细胞舌癌耐药株(Tca81 13／PYM)，观察干扰前后细胞对上述 药物敏感性的差异；同时通过G418选择建立TCRPl表达稳定沉默 的细胞系(Tca8113／PYM．i)；(4)采用MTT、平板克隆、软琼脂克 隆实验观察Tea81 13、Tca81 13／v、Tca8 1 1 3／TCRPl、Tca81 13／pym、 Tca81 13／pym-i、Tca81 13／pym—v等6株细胞的生长速度及对TCRPl 功能相关药物顺铂的敏感性；(5)Hochest 33258染色、流式细胞计 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 数、DNA ladder、及Western Blot等方法检测上述各组细胞药物诱导 后的凋亡状况。 结果：(1)TCRPl外源性高表达Tca8113／TCRPl细胞对cDDP 和PYM的耐受性明显增高，耐药指数分别是对照细胞的2．2倍和1．7 倍(PO．05)；但对5．Fu、ADM、VP．16、T肿、的耐药性无明显改 变；(2)TCRPl表达沉默细胞(Tca8113／pym．i)对cDDP的敏感性 较沉默前细胞Tca8113／pym增加1．5倍(Po．05)，而对包括PYM 在内的其他药物的敏感性均无变化；(3)上述六组细胞的生长增殖速 度无明显差异；(4)经顺铂处理后，Tca81 13／TCRPl、Tca81 13／PYM 平板克隆形成的集落数分别为对照组的2．2和2．9倍；软琼脂克隆形 成的集落数分别为对照组细胞的2．9和3．1倍(PO．05)；TCRPl稳 定沉默的Tea8113／PYM．i细胞比载体对照组细胞(Tca81 13／PYM。v) 分别降低2．2和1．4倍；(5)顺铂诱导后，Tca81 1 3／TCRPl、Tca81 13／pym 细胞凋亡数较各自对照细胞(Tca81 13／v、Tca81 13／pym—V)降低，DNA Ladder电泳带形成不明显，Caspase．3表达降低，而Tca8113／pym—i 细胞的上述各项指标较对照组细胞Tca81 13／pym-v均升高。 结论：(1)TCRPl能特异性介导舌癌细胞对顺铂的耐受，仅在 表达水平较高同时介导对平阳霉素的耐受，而与5．Fu、ADM、VP．16、 THP敏感性无明显差异；(2)TCRPl介导的对顺铂的药物耐受与其 能增强舌癌细胞对cDDP诱导的凋亡抗性有关。 关键词：舌癌耐药蛋白1(TCRPl)，cDDP、PYM、凋亡 II 硕士学位论文 硕士学位论文 英文摘要 ABSTRACT Background0bjective：Tongue cancer is the most common in oral and maxillofacial cancers，clinically treated with conventional surgery in combination with radiotherapy or chemotherapy．Because of the development of resistance by cancer cells to therapeutic drugs whose mechanism has not been